迅速かつ簡便な組織特異的遺伝子ノックダウンマウス作成法の開発

开发一种快速简便的方法来创建组织特异性基因敲除小鼠

• 批准号: 23890073
• 负责人: 大沢 匡毅
• 金额: $ 2.08万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-08-24 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23890073/
• 关键词: 遺伝子改変マウス; ノックダウン; 色素細胞; 遺伝子機能解析

ポストゲノム時代の生命科学の喫緊な課題は、遺伝子の生理的機能を解明することである。ヒトの疾患の多くが遺伝的要因によって引き起こされることから、遺伝子の生理的機能がわかれば疾患の分子的メカニズムが解明され、新たな治療法の開発が可能になる。遺伝子の生理的な機能を明らかにする最も確実な方法は、遺伝子改変マウスを作成し、その表現型解析から遺伝子の機能を決定することである。しかし、従来の遺伝子操作技術は煩雑で多大な時間と労力を要し、問題である。本研究課題では、表現型解析が容易な色素細胞系をモデル系として用い、ES細胞を用いた遺伝子操作技術と胚操作技術を組み合わせることで、迅速かつ容易に色素細胞特異的遺伝子ノックダウンマウスを作成する技術を開発することを目標とする。このために、我々は、色素細胞特異的にCre相同組換え酵素を発現する取Tyr-CreトランスジェニックマウスよりES細胞を樹立するとともに、このES細胞のRosa26遺伝子座特異的にFRTカセットをノックインした安定株を樹立した。これにより、遺伝子ノックダウンコンストラクトを簡便に導入するとともに、Cre相同組み換えによる色素細胞特異的な安定的遺伝子ノックダウンが可能になった。また、樹立したES細胞を、ポリビニールアルコールで処理した8細胞胚にインジェクションすることにより、FO世代でフルキメラマウスを得る技術を確立した。本遺伝子ノックダウンマウス作成技術の有効性を評価する目的で、メラニン色素合成酵素であるTyrosinase遺伝子に対するノックダウンコンストラクトをES細胞に導入し、8細胞胚に移植することにより、マウスを作成した。誕生したマウスは、FO世代で体毛色を消失し、我々が開発した手法の有効性が確認された。本遺伝子操作マウス作成技術を用いることで、体毛色変化を指標にして、迅速に遺伝子機能解析を行うことが可能になった。

The important issues of life science in the era of science and technology, and the explanation of the physiological functions of the living things are explained. The main cause of ヒトのdiseaseの多くが缝 is the physiological mechanism of the disease The molecule that can solve the disease can be solved by され and the new treatment method can be solved by になる. The physiological function of the child is revealed, and the most accurate method is the correct method. The method of changing the child is changed.ウスを成し、そのphenotype analysisから缝子のfunctionalをdeterminationすることである.しかし, 従来の缝子 operating technology は 囑で な time と労力 を Required し、questions である. This research topic is based on the use of pigment cell lines and embryonic manipulation technology for easy phenotype analysis, and the use of ES cells.み合わせることで、quick かつeasy にChromatophore-specific 缝子ノックダウンマウスを成するTechnologyを开発することをtargetとする.このために, I々は, Chromatophore-specific にCre is the same group as the enzyme を発成するTyr-CreトランスジェニックマウスよりES Cells are established and established, and ES cells are established in Rosa26 genetically modified FRT cells. Cr eThe same group of みによるchromatophore-specific なstable residual ノックダウンがpossible になった. ES cell establishment, ES cell establishment, 8-cell embryo processing, and 8-cell embryo processingェクションすることにより, FO generation でフルキメラマウスをgetsるtechnologiesをestablishedした. Evaluation of the effectiveness of the production technology of this legacy ノックダウンマウスES cell guide Input, 8-cell embryos are transplanted into the embryo, and the embryo is made into a embryo. Birth of a new generation, FO generation of body and hair color disappears, and the effectiveness of my technique has been confirmed. The masonry production technology is used in this product, the body hair color change indicator is an indicator, and the rapid wafer function analysis is possible.