ネフロン前駆細胞自己複製法の開発

肾单位祖细胞自我更新方法的开发

• 批准号: 24890171
• 负责人: 神田 祥一郎
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890171/
• 关键词: ネフロン前駆細胞; Sall1; Six2

A.　ネフロン前駆細胞自己複製法の開発：申請者はSix2(ネフロン前駆細胞に特異的に発現している転写因子)-GFPトランスジェニックマウスを用いGFPをマーカーとしたFACSソートによりネフロン前駆細胞の単離培養に成功していた。1)　ネフロン前駆細胞培養条件の確立：既にLIFを添加することでほぼ100%のネフロン前駆細胞を未分化な状態で維持することを見出していたが、さらにCHIR(GSK阻害薬）を加えることでそれを未分化なまま増殖させられることを見出した。　2)　gp130ノックアウトマウスの解析：gp130はLIFの受容体であるがそのノックアウトマウス胎仔腎は低形成腎を呈していた。LIFが腎臓発生において重要な役割を果たしていることが分かった。B.　ネフロン前駆細胞における未分化性維持機構の解明：ネフロン前駆細胞を特徴づける転写因子Six2とSall1の制御する遺伝子群を明らかにし、ネフロン前駆細胞における未分化維持機構を解明する。1)　Six2、Sall1の転写複合体の形成：Sall1Flagノックインマウス胎仔腎を用いて、抗Flag抗体による免疫沈降を行い、両者が複合体を形成することが分かった。　　2)　Six2、Sall1の標的遺伝子同定：Six2、Sall1抗体によって、マウス胎仔腎を用いてChIP-seqを行った。これまでマウス胎仔腎を用いたChIP-seqの報告はほとんどなかったが、良好な結果を得ることができた。Six2とSall1が多くの腎臓発生に重要な遺伝子のプロモーター領域に結合していることやそれぞれの標的配列などが明らかとなった。以上によりSall1はSix2と複合体を形成し、多くの腎臓発生に重要な遺伝子群の発現を制御することで、ネフロン前駆細胞を維持していることが分かった。

A. Development of the method for self-replication of leucoblast cells: Applicant's Six2 (specific primordial cell replication factor)-GFPトランスジェニックマウスを用いGFPをマーカーとしたFA The successful isolation and culture of CS's original cell line was successfully completed. 1) Establishment of the conditions for culturing the stem cells: adding LIF and maintaining the undifferentiated state of the stem cells using 100% stem cellsることを见出していたが、さらにCHIR (GSK HAZARD) を加えることでそれをUndifferentiated なまま Increased reproduction させられることを见出した. 2) gp130ノックアウトマウスの Analysis: gp130はLIFのThe receptor is the fetal kidney and the kidney is formed. LIFが神燓発生においてimportantなServant cutをfruitたしていることが分かった. B. Explanation of the mechanism for maintaining the undifferentiated nature of the nasopharyngeal cells: phylum cylindrical cells special factor Six 2とSall1's control system and the undifferentiated maintenance mechanism of the undifferentiated maintenance mechanism. 1) Formation of the complex of Six2 and Sall1: Sall1Flag ノックインマウス fetus Kidney use, anti-Flag antibody immunoprecipitation, and complex formation are divided into two parts. 2) The target genes of Six2 and Sall1 are the same: Six2 and Sall1 antibodies are used in fetal kidney and ChIP-seq is used. The fetal kidney disease was reported using ChIP-seq, and the good results were obtained by using ChIP-seq. Six2とSall1が多くの神燓発生にimportantな伝子のプロモーターThe field is combined with the standard arrangement of the standard arrangement of the field. The above-mentioned Sall1 and Six2 complexes are formed and are important for the development of kidney function. The subgroup's の発appears to control the することで, and the ネフロンfront 槆cell をmaintains the していることが分かった.

项目成果

The role of Sall1 in the kidney development

Sall1 在肾脏发育中的作用

• 发表时间: 2012
• 作者: Suda K.;et al.;Suda K.;須田 健一;高畠義嗣;Tomoko Namba;Shoichiro Kanda;神田祥一郎
• 通讯作者: 神田祥一郎

Sall1 is essential for the maintenance of nephron progenitors.

Sall1 对于维持肾单位祖细胞至关重要。

• 发表时间: 2013
• 作者: 谷吉雅俊;比木茂寛;佐藤美佳;鳥井康江;服部憲治郎;本山敬一;東 大志;有馬英俊;Shoichiro Kanda and Ryuichi Nishinakamura
• 通讯作者: Shoichiro Kanda and Ryuichi Nishinakamura