錐体オプシンを用いた光遺伝学的手法による睡眠・覚醒制御システムの解析

使用视锥蛋白的光遗传学方法分析睡眠/觉醒控制系统

• 批准号: 26882023
• 负责人: 前島 隆司
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-08-29 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26882023/
• 关键词: 脳・神経; 光遺伝学; 睡眠・覚醒; 錐体オプシン; オレキシン; セロトニン

視床下部及びモノアミン・コリン作動性神経系により形成される睡眠・覚醒制御システムについて、個々の神経系を結ぶ入出力回路の作動機序と機能的役割の解明をめざし、錐体オプシンを用いた光遺伝学的手法を導入し実験を行なった。マウスをモデル動物とし、視床下部オレキシン神経及び縫線核セロトニン神経の神経活動を光遺伝学的に操作し、睡眠・覚醒状態の変化を観察する実験系の立ち上げを行なった。長波長型及び短波長型錐体オプシンをそれぞれ励起波長の重ならない蛍光タンパク質eGFP及びmCherryで標識し、Cre-loxP部位組み換え反応により発現されるようアデノ随伴ウイルスベクターにクローニングした。実験には細胞特異的にCreリコンビナーゼを発現する遺伝子改変マウスを用い、オレキシン神経及びセロトニン神経への遺伝子導入のため、それぞれOrexin-Creマウスの視床下部外側野とSERT-Creマウスの背内側縫線核内にウイルスベクターを投与した。いずれの錐体オプシンもセロトニン神経特異的に発現し、最適波長の光照射により過分極応答を誘発させることをそれぞれ組織学及び電気生理学的手法により確認した。また視床下部においては一部非特異的発現が認められたが、オレキシン細胞においても錐体オプシンの活性化により過分極応答が誘導された。次に、脳波・筋電計測下の生体マウスにおいて、錐体オプシンを導入した神経核に対し光ファイバーを通して直接光照射を行ない、睡眠・覚醒状態の変化を観察する実験システムを構築した。予備的ながら光照射期間において睡眠・覚醒状態の変化を観察した。今後実験系の修正を適時行いつつ実験を重ね、厳密な対照実験との比較から慎重に結論を導出したい。錐体オプシンを用いた光遺伝学的手法は神経回路の機能的役割を解明するための一助となると期待される。

The lower part of the optic bed and the lower part of the optic bed are formed by the sleep and wake control system, and the upper part of the optic bed is formed by the operation of the output circuit and the function of the operation. The animal's brain and brain activity are observed in the light, sleep, and wake states. Long wavelength type and short wavelength type cone options include excitation wavelength, light source, quality eGFP and mCherry identification, Cre-loxP unit byte conversion, and occurrence. The cell specific Cre Cre Cre The results of histological and electrophysiological methods for the identification of neuro-specific findings and ultra-polar responses induced by light irradiation at optimal wavelengths are presented in this paper. A part of non-specific development in the lower part of the optic bed was identified by the activation of the pyramidal cells. In addition, under the condition of wave and muscle measurement, the biological system is introduced into the brain core, and the optical system is constructed by direct light irradiation, sleep and wakefulness. Changes in sleep and wake status can be observed during the prepared light exposure period. In the future, the correction of the system should be carried out in a timely manner, and the results should be carefully derived. The method of optical genetics for cone selection is used to explain the function of the neural circuit.