IgA腎症の成因究明と粘膜免疫系のIgA免疫応答抑制治療法の開発

研究IgA肾病的病因并开发抑制粘膜免疫系统IgA免疫反应的治疗方法

• 批准号: 10557023
• 负责人: 山田 明
• 金额: $ 6.34万
• 依托单位: Kyorin University (2001)Okinaka Memorial Institute for Medical Research (1998-2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10557023/
• 关键词: IgA nephropathy; Etiology; Gram-negative bacteria; Acyl carrier protein; Mucosal immunity; IgA hephropathy; acyl carrier protein; mucosal immunity; 17kD cell wall protein

IgA腎症の原因抗原の候補として我々が提唱している消化管粘膜由来グラム陰性細菌の代表として大腸菌のacyl carrier protein(ACP)に対する複数の単クローン抗体(IgG型5種、IgA型12種)を樹立した。本年度はこれらの単クローン抗体をビオチン標識し、非標識の同単クローン抗体を固相化抗体としたサンドウィッチELISA法を開発した。おのおのの単クローン抗体により、ACPに対する相互の交叉性を検討し、ACP分子表面の抗原エピトープの性状を検索した。そして、異なるエピトープを認識する2種の抗体を用いたELISA法によるACP定量法の感度を検討した。更にこの定量法を応用してBALB/cマウスに一定量のACPを静注後の血中および尿中ACPの動態を経時的に観察した。これらの検討により、分子量8,860の大腸菌ACP上の抗体認識エピトープは主として5カ所あり、それらは相互に連続して存在することが明らかとなった。ACPの検量線は0.1〜100ng/mlの間で良好な直線性が得られ、ACPの高感度定量が可能となった。またマウスにおいてACP投与1分後にACP血中濃度は最大ピークに達し、10分後には90%が血中より急速に消失した。1時間後の尿中には投与したACPのほぼ全量が回収された。すなわち血液中にはACPの結合蛋白は存在しないものと考えられた。このACPアッセイ系では、通常の条件で飼育されているBALB/cマウスの血液中にはACPは感度以下であった。以上の結果より、ACPは抗原としての免疫原性は認めるものの生体内には留まり難く、免疫応答に充分な抗原暴露を呈さない可能性を認めた。このことはACPに対する抗体価が高値である多くのIgA腎症にとってACP抗原に対する過敏な免疫応答の機序が存在し、IgA腎症がいわゆるIgA型アレルギーである可能性を示唆すると考える。

As a candidate for the causative antigen of IgA kidney disease, we have been able to establish a plurality of monoclonal antibodies (5 IgG types, 12 IgA types) against the acyl carrier protein(ACP) of Escherichia coli, a representative of gram-negative bacteria originating from the digestive tract mucosa. This year, the ELISA method for the identification and non-identification of anti-human antibodies was developed. The interaction between ACP molecules and antibodies is discussed, and the characteristics of ACP molecules are discussed. The sensitivity of two kinds of antibodies was studied by ELISA and ACP quantitative method. In addition, the quantitative method was used to detect the dynamic state of ACP in blood and urine after intravenous injection. The antibody on the E. coli ACP with molecular weight of 8,860 is recognized as a "positive" antibody and a "negative" antibody. ACP calibration curve is 0.1 ~ 100ng/ml and good linearity is obtained, ACP high sensitivity quantification is possible. ACP concentration in blood reaches maximum after 1 minute, 90% in blood after 10 minutes. After a while, the whole amount of urine and ACP was recovered. ACP binding protein exists in the blood. The ACP is not sensitive to normal conditions. These results suggest that the immunogenicity of ACP antigen may be affected in vivo, and the possibility of antigen exposure may be affected by immune response. The high level of antibodies against ACP indicates the existence of mechanisms of immune response to IgA nephropathy, and the possibility of IgA nephropathy.

项目成果

Yokoyama K: "ApaI polymorphism in the vitamin D receptor gene may affect the parathroid response in Japanese with end-stage renal disease." Kidney International. 53. 454-458 (1998)

Yokoyama K：“维生素 D 受体基因中的 ApaI 多态性可能会影响患有终末期肾病的日本人的甲状旁腺反应。”

Endo Y.: "Ayl carrier protein of gram negative bacterial cell wall as a common antigen in primary and carrhotic IgA nephropathy"Nephrology. 5(in press). (2000)

Endo Y.：“革兰氏阴性细菌细胞壁的酰基载体蛋白作为原发性和硬化性 IgA 肾病的常见抗原”肾脏病学。

Takemoto F.: "Induction of renal tubular acidosis in mice immunized with human carbonicanhydrase II"Journal of American Society of Nephrology. 10. 522A (1999)

Takemoto F.：“用人碳酸酐酶 II 免疫的小鼠诱导肾小管酸中毒”美国肾脏病学会杂志。

Endo Y.: "Acyl carrier protein of gram-negative bacterial cell wall as a major etiologi antigen of human primary immunoglobulin A nephropathy"Journal of American Society of Nephrology. 10. 510A (1999)

Endo Y.：“革兰氏阴性细菌细胞壁的酰基载体蛋白作为人原发性免疫球蛋白A肾病的主要病因学抗原”美国肾病学会杂志。

Yokoyama K: "Hypererythropoitinemia and hyperretinemia in a continuous ambulatory peritoneal dialysis patient with chronic severe hypotention." Clinical Nephrology. 50. 60-63 (1998)

Yokoyama K：“患有慢性严重低血压的连续不卧床腹膜透析患者的高红细胞生成素血症和高视网膜血症。”