選択的卵胞閉鎖の分子制御機構の解明とその人為支配

选择性卵泡闭锁的分子调控机制阐明及其人工调控

• 批准号: 12460125
• 负责人: 眞鍋 昇
• 金额: $ 6.91万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12460125/
• 关键词: アポトーシス; 卵胞; 細胞死受容体; デコイ受容体; HVJ-リポソーム; 遺伝子導入; モノクローナル抗体; ブタ

哺乳類の片側卵巣には胎児期に減数分裂前期後半で休止した卵母細胞が5〜10万個含まれている。性周期毎に繰り返される排卵の過程で99%以上が消滅してしまい、1%以下が排卵に至る。この選抜の結果、優秀で強靭な子孫が残ると考えられるが、その制御機構は未解明である。本研究の目的は、選抜の分子機構を明らかにし、ex vovo遺伝子導入によって人為支配技術を創出することにある。そのために(1)選択的卵胞死滅の制御機構の解明:既知細胞死受容体と異なる卵胞顆粒層細胞に特異的な新規アポトーシス受容体を見出しており、これを介した卵胞の選択的死滅の分子制御機構を明らかとする。次いで(2)ex vovo遺伝子導入による細胞死の人為支配技術の創出:細胞死受容体およびこのシグナル伝達系に関わるカスパーゼをコードする遺伝子を、HVJ-リポソーム法にて卵巣にex vovo導入し、卵胞の選択的死滅の人為支配技術を創出する。今年度は(1)新規アポトーシス受容体の同定とシグナル伝達系の解析:健常卵胞から調製した初代培養顆粒層細胞にアポトーシスを特異的に誘導できるモノクローナル抗体が認識する細胞膜結合性糖蛋白は、既知アポトーシス受容体とは異なる新規受容体である。この抗体を用いてアフィニティーカラムを作製し、アポトーシス受容体を精製してアミノ酸配列を決定している。併せて、特異的mRNAをアフィニティーカラムにて調製し、RT-DNAシーケンス法にて全塩基配列を決定している。予備研究から、新規アポトーシス受容体には既知受容体と同様に「death-domain」が存在するので、RT-PCR検出系を作成するとともに、局在解析のためにin situ hybridizationプローブを作成して、顆粒層細胞のアポトーシス過程および黄体細胞化への過程におけるアポトーシス受容体遺伝子の発現と局在の推移を明らかとした。(2)in vivo遺伝子導入法の確立:卵胞閉鎖を人為支配するため、SABレクチン/HVJ-リポソーム遺伝子導入法の基礎検討を行った。

Mammalian parietal oocytes に に fetal 児 stage に pre-meiotic posterior hemiosis で resting embryonic た oocytes が 50,000 to 100,000 containing まれて まれて る る る. In their sexual cycle に Qiao り return さ れ る ovulation で の process more than 99% が eliminate し て し ま い, below 1% が に to る ovulation. The results of the <s:1> selection, the outstanding で, the strong 靭な, the が descendants, the disabled ると examination えられるが, and the そ control institution 靭な have not been clarified である. は の purpose, this study selected institutions sorting の molecules を Ming ら か に し, ex vovo posthumous son 伝 import に よ っ て を artificial control technology makes す る こ と に あ る. そ の た め に sentaku (1) of the follicle die out の royal institution の interpret: know both cell death by let body と different な る follicle granular layer cells に specific な new rules ア ポ ト ー シ ス out by let body を し て お り, こ れ を interface し た follicle の sentaku die out of molecular system royal institution を Ming ら の か と す る. Time い で (2) the ex vovo posthumous son 伝 import に よ る の の artificial control technology makes cell death, cell death by let body お よ び こ の シ グ ナ ル 伝 da system に masato わ る カ ス パ ー ゼ を コ ー ド す る heritage 伝 を, HVJ - リ ポ ソ ー ム method に て eggs 巣 に ex vovo import し, follicle の sentaku die out of の を artificial control technology makes す る. Our は "(1) the new rules ア ポ ト ー シ ス の by let body with constant と シ グ ナ ル 伝 da の analytic: health often follicle か ら modulation し た original cultivating granular layer cells に ア ポ ト ー シ ス を specific に induced で き る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody が know す る associativity cell membrane glycoprotein は, both known ア ポ ト ー シ ス by let body と は different な る new rules by let body で あ る. を こ の antibody with い て ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム を as し, ア ポ ト ー シ ス を refined by let body し て ア ミ ノ acid with column を decided し て い る. And せ て, specific mRNA を ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム に て modulation し, RT - DNA シ ー ケ ン ス method に て salt base full column を decided し て い る. Reserve study か ら, new rules ア ポ ト ー シ ス by let body に は と known as let body with others に "death - domain" が exist す る の で, rt-pcr を 検 out department made す る と と も に, bureau in parsing の た め に in situ Hybridization プ ロ ー ブ を made し て, granular layer cells の ア ポ ト ー シ ス process お よ び corpus luteum cellular へ の process に お け る ア ポ ト ー シ ス by let body heritage 伝 son の 発 now と bureau in の を Ming ら か と し た. (2) the in vivo posthumous son 伝 の establish import method: follicle atresia を human dominate す る た め, SAB レ ク チ ン / HVJ - リ ポ ソ ー ム posthumous son 伝 import method based 検 の line for を っ た.

项目成果

Susumu Nishihara,Noboru Manabe,Hajime Miyamoto et al.: "Changes in cell adhesion molecules during follicular atresia in porcine ovaries."Journal of Reproduction and Development. 46・3. 325-334 (2000)

Susumu Nishihara、Noboru Manabe、Hajime Miyamoto 等：“猪卵巢卵泡闭锁期间细胞粘附分子的变化”。生殖与发育杂志 46・3（2000 年）。

Mizuho Nakayama,Noboru Manabe,Hajime Miyamoto et al.: "Species specific differences in apoptotic cell localization in granulosa and theca interna cells during follicular atresia in porcine and bovine ovaries."Journal of Reproduction and Development. 46・2.

Mizuho Nakayama、Noboru Manabe、Hajime Miyamoto 等人：“猪和牛卵巢卵泡闭锁期间颗粒细胞和卵泡膜内细胞凋亡细胞定位的物种特异性差异。”生殖与发育杂志 46・2。

Noboru Manabe,Akira Myoumoto,Chiemi Tajima,Hajime Miyamoto et al.: "Immunochemical characteristics of a novel cell death receptor and a decoy receptor on granulosa cells of porcine ovarian follicles."Cytotechnology. 33・2. 189-201 (2000)

Noboru Manabe、Akira Myoumoto、Chiemi Tajima、Hajime Miyamoto 等：“猪卵巢卵泡颗粒细胞上的新型细胞死亡受体和诱饵受体的免疫化学特征”。《细胞技术》33・2。

Noboru Manabe,Miki Sugimoto,Maki Morita,Hajime Miyamoto et al.: "In vivo noninvasive nuclear magnetic resonance technique for assessment of teratogenicity induced by environmental pollutants."Environment Measurement and Chemical Analysis. 27・1. 60-66 (200

Noboru Manabe、Miki Sugimoto、Maki Morita、Hajime Miyamoto 等：“用于评估环境污染物引起的致畸性的体内无创核磁共振技术”。环境测量和化学分析 27・1。

Kozue Uchio,Noboru Manabe,Kotaro Tamura,Makoto Miyamoto et al.: "Decreased matrix metalloproteinase activity in the kidneys of hereditary nephrotic mice (ICGN strain)."Nephron. 86・1. 145-141 (2000)

Kozue Uchio、Noboru Manabe、Kotaro Tamura、Makoto Miyamoto 等：“遗传性肾病小鼠（ICGN 品系）肾脏中基质金属蛋白酶活性降低。”Nephron 86・1（2000 年）。