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卵胞の選択的死滅を決定する新規顆粒層細胞特異的アポトーシス受容体の探索とその制御

寻找一种决定卵泡选择性死亡的新型颗粒细胞特异性凋亡受体及其调控

基本信息

批准号：
11876064
负责人：
眞鍋昇
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類卵巣では99%以上の卵胞が選択的に死滅する。この選択的死滅機構に顆粒層細胞アポトーシスが支配的に関与しているが、その誘導機構は未だ不明である。本研究の目的は、新規アポトーシス受容体を探索してこの機構を解明することである。すなわち、顆粒層細胞アポトーシスを局所的に支配する新規な卵胞特異的アポトーシス受容体とそれに関わるシグナル伝達機構を解明するため、健常卵胞の顆粒層細胞に特異的にアポトーシスを誘導できるモノクローナル抗体をプローブとして、アポトーシスを誘導する膜結合性新規アポトーシス受容体の同定、これをコードするmRNAの同定、新規アポトーシス受容体の糖鎖構造の解析、顆粒層細胞に特異的なアポトーシス・リガンドの探索、アポトーシスシグナルの細胞内伝達系の解析を行った。(1)新規アポトーシス受容体の同定・局在:抗体アフィニティーカラムを作製して受容体を精製し、発育ステージ別にアポトーシス受容体の発現と局在を明らかとした。(2)アポトーシス受容体mRNAの同定と発現・局在:細胞質リボゾーム部で「受容体-リボゾーム-mRNA複合体」を形成しているmRNAを精製し、これを鋳型として相補的DNAをin vitro合成し、アポトーシス受容体蛋白mRNAの全塩基配列を決定し、次いで相補的DNAをプローブとして、Northern hybridization法とin situ hybridization法を併用して発育ステージ別に顆粒層細胞におけるmRNAの局在の推移を明らかにした。(3)新規アポトーシス受容体の糖鎖構造の解析:受容体蛋白に結合する糖鎖は立体構造や細胞表層の配位を決定する重要な役割をもつ。グリコペプチダーゼ、エンド-β-ガラクトシダーゼ等の糖鎖配列を認識する酵素にて消化後、糖鎖構造を推定し、核磁気共鳴装置を用いて構造生物学的に構造決定を行い、Vliegenthart-糖蛋白由来糖鎖NMRスペクトルデータベースを検索して糖鎖構造を構造生物学的に決定し、アポトーシス受容体に結合している糖鎖の立体配位とその生理機能を明らかとした。

The number of dead eggs selected by mammalian oocytes is more than 99%. The selected dead organs do not have any unknown information on the control of the dead organs and the leading organs. The purpose of this study is to explore the purpose of this study. The purpose of this study is to explore the purpose of this study. This is the case of the local government that controls the new regulation of egg cell specialty. the recipient body is responsible for the diagnosis of the disease, the normal oocyte cell is specific for the normal oocyte, the recipient is responsible for the detection of the egg cell, the normal oocyte, the normal oocyte, the normal oocyte and the normal oocyte. The purpose of this study is to determine the binding capacity of the membrane, determine the tolerance of the membrane, analyze the sugar of the acceptor, analyze the sugar of the acceptor, explore the characteristics of the cell, and analyze the intracellular DNA of the cell. (1) the new rules are as follows: the antibody is used to treat the recipient, and the antibody is used to treat the receptor. the results show that the antibody is sensitive to the receptor. (2) the mRNA homology of the receptor is determined in the following parts: the capacitor, the receptor, the mRNA complex, the DNA, the in vitro synthesis, the receptor protein, the mRNA, the whole base, the DNA, the second, the second. In the Northern hybridization method, the in situ hybridization method is used to determine the size of the cell, the cell, the mRNA, and so on. (3) Analysis of receptor glucose production in new regulations: the combination of receptor protein and glucose to make the cell surface, coordination to determine the importance of amputation. After digestion of enzymes, presumption of sugar production, nuclear magnetic resonance (NMR) devices were used to determine the origin of Vliegenthart- glycoproteins in biology, NMR glycoproteins, glycoproteins, glycosaminoglycans, glycoproteins, glycoproteins. The physiological mechanism of the receptor can be clearly demonstrated by the combination of the receptor and the stereo coordination of the receptor.