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Identification and functional analysis of novel proteins regulating platelet activation which triggers arterial thrombosis.

调节引发动脉血栓形成的血小板活化的新型蛋白质的鉴定和功能分析。

基本信息

批准号：
15590740
负责人：
HORIUCHI Hisanori
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

The trigger of arterial thrombosis inclusing acute coronary syndrome is platelet activation. However, the mechanism is largely unknown since it has been difficult to apply molecular biology on this research. To overcome the difficulty, we have developed assay systems for analyzing aggregation of granule secretion using platelets permeabilized with streptolysin-0 (Methods Enzymol. 2005, invited). We are investigating these mechanisms with these systems. In 2003, we directly demonstrated that PKCα is essential for the aggregation (JBC, 2003). In 2004, we demonstrated that an adaptor protein ShcA which binds to tyrosine-phophorylated β3 subunit of integrin, is essential for platelet aggregation (BBRC, 2004). We found that small GTPase Rab27 regulates dense-granule secretion (JBC, 2004). We further identified Munc13-4, a non-neuronal homologue of Munc13-1, an essential priming factor in neurotransmitter release, in platelet cytosol as a GTP-Rab27 binding protein using an affinity method and demonstrated that Munc1-4 regulates dense-granule secretion in platelets. This is the first indication that a RabGTPase directly regulates a member of Munc13. In collaboration with a Japanese research group investigating hemophagocytic syndrome, we found that approximately 30% of familial hemophagocytic syndrome is caused by mutation of Munc13-4 gene (FHL3) and that FHL3 patients reveals milder phenotype than patients caused by non-sense mutation of perforin (FHL2) (Blood, 2005).

包括急性冠状动脉综合征在内的动脉血栓形成的触发因素是血小板活化。然而，由于分子生物学研究的困难，其作用机制在很大程度上是未知的。为了克服这一困难，我们开发了一种检测系统，利用溶血素-0渗透的血小板来分析颗粒分泌的聚集（Methods enzymatic . 2005，应邀）。我们正在用这些系统研究这些机制。在2003年，我们直接证明PKCα对于聚集是必不可少的（JBC, 2003）。2004年，我们证明了与酪氨酸磷酸化的整合素β3亚基结合的接头蛋白ShcA对血小板聚集至关重要（BBRC, 2004）。我们发现小GTPase Rab27调节致密颗粒分泌（JBC, 2004）。我们进一步用亲和方法鉴定了血小板胞浆中与Munc13-1（神经递质释放的必要启动因子）非神经元同源物Munc13-4是GTP-Rab27结合蛋白，并证明Munc1-4调节血小板中致密颗粒的分泌。这是RabGTPase直接调控Munc13成员的第一个迹象。我们与日本研究组合作研究噬血细胞综合征，发现家族性噬血细胞综合征中约30%是由Munc13-4基因突变（FHL3）引起的，FHL3患者的表型较穿孔素无义突变（FHL2）引起的患者更为温和（Blood, 2005）。

项目成果

期刊论文数量（28）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Munc13-4 is a GTP-Rab27-binding protein regulating dense core granule secretion in platelets

DOI：
10.1074/jbc.m309426200
发表时间：
2004-03-12
期刊：
JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子：
4.8
作者：
Shirakawa, R;Higashi, T;Horiuchi, H
通讯作者：
Horiuchi, H

R.Shirakawa et al.: "Munc13-4 Is a GTP-Rab27-binding Protein Regulating Dense Core Granule Secretion in Platelets"J.Biol.Chem.. (in press). (2004)

R.Shirakawa 等人：“Munc13-4 是一种调节血小板中致密核心颗粒分泌的 GTP-Rab27 结合蛋白”J.Biol.Chem..（出版中）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Munc13-4 is a GTP-Rab27 binding protein regulating dense core granule secretion in plateles.

Munc13-4 是一种 GTP-Rab27 结合蛋白，调节血小板中致密核心颗粒的分泌。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Biol.Chem. 279
影响因子：
0
作者：
Shirakawa他;E.Ishii他;R.Shirakawa et al.;E.Ishii et al.;E.Ishii他;T.Higashi他;R.Shirakawa他;T.Higashi et al.;Kazuhiro Yamamoto;R.Shirakawa et al.
通讯作者：
R.Shirakawa et al.

Identification of protein kinase Ca as an essential cytosolic factor for Ca2+-induced platelet aggregation.

鉴定蛋白激酶 Ca 作为 Ca2 诱导血小板聚集的重要胞质因子。

DOI：
发表时间：
2003
期刊：
J.Biol.Chem 278
影响因子：
0
作者：
Shirakawa他;E.Ishii他;R.Shirakawa et al.;E.Ishii et al.;E.Ishii他;T.Higashi他;R.Shirakawa他;T.Higashi et al.;Kazuhiro Yamamoto;R.Shirakawa et al.;Kazuhiro Yamamoto;T.Higashi他;Kazuhiro Yamamoto;A.Tabuchi他
通讯作者：
A.Tabuchi他

Direct demonstration of involvement of the adaptor protein ShcA in the regulation of Ca^<2+>-induced platelet aggregation.

直接证明接头蛋白ShcA参与Ca 2+ 诱导的血小板聚集的调节。