放線菌を利用した光誘導型タンパク質大量生産系の創生

利用放线菌创建光诱导蛋白质大规模生产系统

• 批准号: 22H02248
• 负责人: 高野 英晃
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02248/
• 关键词: 光センサー; タンパク質生産; 放線菌; 組換えタンパク質生産; ファージRNAポリメラーゼ; 組換えタンパク質

放線菌Streptomyces griseusをホストとして、ビタミンB12型光センサーLitRを応用した組換えタンパク質の光誘導型大量生産系プロトタイプの構築に成功し、LiEX(Light inducible Expression)システムと命名した。1. プラスミド型LiEXシステム(pLiEX)放線菌由来のpIJ101型マルチコピープラスミドにLitRとσ因子LitSを導入したプラスミドpLit19を構築し、レポーター酵素β-グルクロニダーゼ(GUS)活性を指標として機能を評価したところ、光照射時においてのみ極めて高いGUS活性が確認された。細胞内における発現量を解析したところ、細胞内で最も生産量の高いタンパク質として検出されたことから、光誘導型プラスミドの構築に成功した。また、ホストの検討を行ったが、S. griseusで非常によく機能する一方で、S. lividansなどの他の放線菌では機能しなかったが、その理由は不明である。2. ゲノム組込み型LiEXシステム(iLiEX)光スイッチLitRSとT7RNAポリメラーゼを連結してゲノム上に組み込んだところ、光スイッチLitRS単独の場合と比較して、転写レベルを500～1000倍に増幅できることを見出した。これはT7RNAポリメラーゼが効率よくT7プロモーターからの転写を行ったことが原因と考えられる。上記のプラスミド型と異なって、ゲノム上に組み込むため、ゲノム上における高い保持性、シングルコピーのためコピー数効果による二次的効果の可能性排除など複数の利点を有している。また、ファージインテグラーゼを用いたゲノム組込みベクターは、大腸菌からの接合伝達によって極めて高効率・簡便にDNAを導入できる。

The bacteria Streptomyces griseus

项目成果

放線菌のカルコフォア合成様遺伝群の発現制御を担うシグマ因子SigCの解析

分析放线菌中控制类硫基团合成基因表达的 sigma 因子 SigC

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤本正浩;Salvatore Cosentino;按田瑞恵;佐藤光彦;中村佳司;小椋義俊;林哲也;岩崎渉;上田賢志;髙野英晃
• 通讯作者: 髙野英晃

放線菌を利用した新規なビタミンB12バイオアッセイ法の開発とその応用

一种新型放线菌维生素B12生物测定方法的建立及其应用

• 发表时间: 2023
• 作者: ZHANG YUSHU;髙野 英晃
• 通讯作者: 髙野 英晃

ゲノム組み込みベクターを用いた放線菌のタンパク質大量生産系

使用基因组整合载体的放线菌蛋白质批量生产系统

• 发表时间: 2023
• 作者: 岡崎太一;髙野英晃
• 通讯作者: 髙野英晃

酢酸菌の光活性型転写アクチベーターLOV-HTHの機能解析

醋杆菌中光激​​活转录激活因子 LOV-HTH 的功能分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 宮下和樹;髙野英晃
• 通讯作者: 髙野英晃

光で誘導できるPseudomonas属細菌 の遺伝子発現系

假单胞菌光诱导基因表达系统

• 发表时间: 2023
• 作者: 見付蒼一郎;髙野英晃
• 通讯作者: 髙野英晃