人工プライベートシャペロンシステムの構築と難発現タンパク質生産への応用

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当初の研究目的および研究実施計画にしたがい，自然に見出されるプライベートシャペロンとその基質タンパク質のペアを人工的に再構成することを目指し，基質タンパク質に結合する人工タンパク質の取得にとりかかった。また，ファージディスプレイライブラリーからの人工タンパク質の選別過程そのものに問題がないかを検証する必要が考えられた。主な成果は以下の通りである。(1) プライベートシャペロンHSP47の基質であるコラーゲンに結合することが報告されているタンパク質やペプチドを提示したファージを新しく準備した。しかし，これらのコラーゲンへの結合を確認できなかった。このことから，選別過程に問題があるか否かについては，検討することはできなかった。(2) 新しい設計に基づく人工タンパク質のファージディスプレイライブラリーを構築するために，組合せ変異導入箇所の妥当性に関する基礎的データを取得した。(3) 人工タンパク質の骨格となる一本鎖モネリンについて，1残基の変異導入により熱安定性が向上することを見いだした。これにより，より有用な新しい人工タンパク質のファージディスプレイライブラリーを作製できる可能性が高まった。(4) 別のプライベートシャペロンRAPとLAモジュールペアの再構築に関して，すでに得ていたLDL受容体のLA2に結合する人工タンパク質のLDL受容体細胞外領域に対する分泌効率への影響を調べた結果，ほとんど分泌効率には影響がなかった。