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放線菌の形態分化開始に対するグルコース抑制機構の解明

阐明放线菌形态分化启动的葡萄糖抑制机制

基本信息

批准号：
01J06788
负责人：
高野英晃
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までに放線菌S.griseusのストレス応答性σ^Hはanti σ因子RshAを介して培地中のグルコースに応答した形態分化及びストレプトマイシン生産の開始に関与することを報告した。今回は、RshAによって制御されるσ^H以外のσ因子群及びRshAに対するanti-anti σ因子の同定と解析を目的とした。網羅的なTwo-Hybrid-Systemを用いた実験から、RshAはσ^Hと同族のσ^F及びσ^Lと相互作用することが判明した。この結果は、in vitroランオフ転写実験からも支持され、RshAはσ^Hと同族のσ^F及びσ^Lと相互作用し、それらの活性を負に制御することが明らかになった。RshAの過剰発現によってσ^Fとσ^L依存的なプロモーターの転写が阻害されたことは、細胞内においてRshAがσ^Fとσ^Lの活性を抑制していることを示している。遺伝子破壊実験から、これらのσ因子群は共通して菌糸のメラニン生産及び胞子の色素生産に関与することが考えられた。上記と同様なTwo-Hybrid-Systemを用いた解析から、RshAはS.coelicolor A3(2)において同定されているanti-anti σ因子BldGによって制御されることが予想された。このBldGとRshA間の相互作用は、Pull down assayによって得られた結果からも支持された。このBldGの機能は、in vitroランオフ転写アッセイの結果からRshAに対するanti-anti-σ因子であることが判明した。染色体上のbldG遺伝子を欠失させることで作製したbldG遺伝子破壊株は、S.coelicolor A3(2)の場合と同様に分化能を完全に欠損し、この破壊株においては、σ^Hσ^F及びσ^Lに依存的なプロモーターの転写が著しく低下していた。このことから、RshAの制御はBldGを介して行われることが考えられた。

In the past year, S.griseus has been reported to have the ability to respond to a variety of factors, such as RshA, to induce morphological differentiation and to initiate production. In this paper, RshA is used to control the sigma factor group other than σ^H, and RshA is used to analyze the anti-anti sigma factor identity. The Two-Hybrid-System is used to identify the interaction between σ^H and σ^L. The result is that RshA interacts with σ^F and σ^L of σ^H, and its activity is negatively controlled. RshA's over-expression is inhibited by σ^F and σ^L's dependence on RshA's activity. The gene expression and the gene expression are related to the gene expression and the pigment production of the cell. Note that the same Two-Hybrid-System is used in the analysis, RshA and S.coelicolor A3(2) to determine the same anti-anti sigma factor BldG. The interaction between BldG and RshA is a Pull down assay. The function of BldG is to determine the anti-anti-sigma factor in vitro. The bldG gene on the chromosome is missing, and in the case of S.coelicolor A3(2), the same differentiation energy is completely missing, and the dependent genes on the chromosome are reduced. This is the first time I've ever seen you.