First responding cells induced by excitation-transcription coupling and their contribution to the onset of vascular remodeling.

由兴奋转录耦合诱导的第一反应细胞及其对血管重塑开始的贡献。

基本信息

批准号：
22H02773
负责人：
鈴木良明
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

血管平滑筋細胞のカベオラ内にCav1.2-CaMKK2-CaMK1α分子複合体が形成されることを見出した。脱分極刺激によるCav1.2チャネルが活性化して、流入したCa2+がCaMKK2およびCaMK1αを活性化すること、またCaMKK2がCaMK1αを完全に活性化してその核移行を誘発することを発見した。これにより、核内で転写因子CREBのリン酸化が起こり、Ca2+シグナルがマクロファージの遊走・浸潤を促進する遺伝子群の転写に変換された（この過程をExcitation-transcription couplingと呼ぶ）。実際にマウス生体で腸間膜動脈に対して圧負荷をかけたところ、平滑筋細胞におけるCREBのリン酸化と血管外膜へのマクロファージの遊走が観察された。また、血管中膜の肥厚も検出された。一方で、cav1-KOマウスやCaMKK2阻害薬STO609を投与したマウスではこれらの反応が減弱された。この一連の研究により、血管障害後のマクロファージの集積および血管リモデリングの発生に関する分子メカニズムの一端が明らかになった（Suzuki Y et al., PNAS, 2022; Suzuki Y et al., Biol Pharm Bull, 2022）。Jackson研究所より、SM22-CreマウスとAi32 (RCL-ChR2(H134R)/EYFP)マウスを入手し、交配させることで分化型SMC特異的ChR2発現マウス（SMC-ChR2）を作製した。青色LEDを用いた光刺激により、血管平滑筋細胞内で細胞内Ca2+濃度が上昇する系を立ち上げることに成功した。CaMKK2活性に対する薬効を生細胞内でアッセイすることができる系を立ち上げた。現在までに、HEK293細胞あるいはHela細胞にhCaMKK2とその活性を測定するFRET probeを発現させることで、既知のCaMKK2阻害薬の効果を評価することに成功した。

已经发现，在血管平滑肌细胞的小窝中形成了CAV1.2-CAMKK2-CAMK1α分子复合物。我们发现去极化刺激激活CAV1.2通道，并且流入的Ca2+激活CaMKK2和CAMK1α，并且CAMKK2完全激活了CAMK1α并诱导其核转运。这导致了细胞核中转录因子CREB的磷酸化，并且Ca2+信号转化为促进巨噬细胞迁移和侵袭的一组基因的转录（此过程称为激发转录偶联）。实际上，在小鼠的肠系膜动脉上施加压力负荷，并观察到平滑肌细胞中CREB的磷酸化，并观察到巨噬细胞迁移到血管外膜。还检测到血管培养基的增厚。另一方面，这些反应在CAV1-KO小鼠和接受CAMKK2抑制剂STO609的小鼠中减弱。这一系列研究揭示了血管损伤后巨噬细胞积累和血管重塑的发展的一部分（Suzuki Y等，PNAS，2022； Suzuki Y等，Biol Pharm Bull，2022年）。从杰克逊研究所获得了SM22-CRE小鼠和AI32（RCL-CHR2（H134R）/EYFP）小鼠，然后进行配合以产生不同的SMC特异性CHR2表达小鼠（SMC-CHR2）。通过使用蓝色LED的光刺激，我们成功建立了一个系统，在该系统中，细胞内Ca2+浓度在血管平滑肌细胞中增加。建立了一个系统，该系统允许对活细胞中CAMKK2活性的药物功效测定。迄今为止，我们通过表达HCAMKK2和一种测量其在HEK293或HELA细胞中活性的FRET探针，成功地评估了已知CAMKK2抑制剂的影响。

项目成果

期刊论文数量（23）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

血管平滑筋細胞の筋小胞体-ミトコンドリア連関におけるミトフュージン2の役割

线粒体融合蛋白2在血管平滑肌细胞肌浆网-线粒体偶联中的作用

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
稲垣奏;鈴木良明;今泉祐治;山村寿男
通讯作者：
山村寿男

Upregulated ClC3 Channels/Transporters Elicit Swelling-Activated Cl<sup>−</sup> Currents and Induce Excessive Cell Proliferation in Idiopathic Pulmonary Arterial Hypertension

特发性肺动脉高压中 ClC3 通道/转运蛋白上调可引发肿胀激活的 Cl<sup>−</sup> 电流并诱导细胞过度增殖

DOI：
10.1248/bpb.b22-00513
发表时间：
2022
期刊：
Biological and Pharmaceutical Bulletin
影响因子：
2
作者：
Amano Taiki;Yamamura Aya;Fujiwara Moe;Hirai Seiji;Kondo Rubii;Suzuki Yoshiaki;Yamamura Hisao
通讯作者：
Yamamura Hisao

名古屋市立大学　大学院薬学研究科　細胞分子薬効解析学分野

名古屋市立大学药学研究生院细胞与分子药效分析系