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フラビウイルス蛋白質量恒常性維持の分子機構解明

阐明黄病毒蛋白稳态维持的分子机制

基本信息

批准号：
22H02873
负责人：
森田英嗣
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

研究項目1. 一部のウイルス非構造蛋白質のみが選択的にERADで分解される分子機構の解明：日本脳炎ウイルスのEタンパク質、prMタンパク質とNS1タンパク質の糖鎖修飾を欠損させた変異体の安定性が著しく減弱することを見出した。また、これらの変異体ではウイルス増殖が著しく抑制されていた。これらの結果は、糖鎖修飾にウイルスタンパク質のフォールディングを助ける作用があることを示しており、糖鎖修飾はERADによる認識に利用されていることを示している。研究項目2. ウイルス感染細胞内でERAD因子が集積するコンボリューティッド膜(CM)の解析：日本脳炎ウイルスNS4AのC末端領域がCM膜形成に必要な宿主因子LNPとの相互作用に必要であることを明らかにした。また、タイムラプスイメージング解析によりLNPがウイルス複製オルガネラに集積する動態を捉えることに成功した。研究項目3. ２種類の異なるCM構造の役割と形成・維持機構の解明：電子線トモグラフィーによるCM膜構造データのさらなる取得を進めた。さらに、凍結細胞活断によるオスミウム浸軟法によるCM膜構造の3D走査型電子顕微鏡（SEM）イメージの取得も進めてきた。複製オルガネラ解析のためのオスミウム浸軟法SEM解析の固定方法を確立した。研究項目4.他のストレス誘導時に見られるCM様構造との比較解析(ウイルス因子のViroporinとしての役割) ：タプシガルギン処理によって出現するCM様構造の電子顕微鏡解析を行い、CM様構造データを取得した。また、Fura 2-AM を用いたカルシウムイオン濃度変化測定の条件検討を進め、各ウイルスタンパク質発現によるカルシウムチャネル活性を同定することに成功した。

Research project 1. Part of the explanation of the molecular structure of the non-structural proteins and their molecular structure: Japanese のウイルスのEタンパクQuality, prMタンパク性とNS1タンパクqualityのsugar lock modificationをlack damageさせた変variantのstabilityが旷く weakenedすることを见出した.また, これらの変variant ではウイルス Increase reproduction and suppress されていた. The result of the sugar lock, the sugar lock modification effectことをshows しており, sugar lock modification はERAD による recognizes されていることをshows している. Research project 2. Analysis of the concentration of ERAD factors in infected cells by ERAD factors in the ERAD membrane (CM): Japanese ERAD The C-terminal domain of NS4A is necessary for CM membrane formation and the host factor LNP is necessary for interaction.また、タイムラプスイメージングanalyticsによりLNPがウイルスCopy オルガネラにassemble するdynamic をcaptureえることにsuccessfulした. Research project 3. Explanation of the formation and maintenance mechanism of 2 types of different CM structures: Electronic wire CM film structure acquisition and maintenance.さらに、Frozen cell viability cleavage によるオスミウムMaceration method によるCM membrane structure 3D walk-through electron microscope (SEM) イメージの Obtained も enter めてきた. Copy the オルガネラanalysisのためのオスミウム maceration method SEM analysisのfixed methodした. Research project 4. Comparative analysis of other のストレス induced に见られるCM様structural との(ウイルス Factor のViroporin としての佶) : タプシガルギン Processing によってappearanceするCM様structuringのelectronmicroscopeanalysisを行い、CM様structuringデータをgettingした.また、Fura 2-AM を Use いたカルシウムイオン concentration change measurement The conditions are as follows: the quality of each item is determined by the success of the activity.