染色体不安定性に着目した大腸癌の抗癌剤耐性機序の解析
以染色体不稳定性为中心的结直肠癌抗癌耐药机制分析
基本信息
- 批准号:22H03060
- 负责人:
- 金额:$ 11.23万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
- 财政年份:2022
- 资助国家:日本
- 起止时间:2022-04-01 至 2025-03-31
- 项目状态:未结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
大腸癌患者よりpatient-derived organoid(PDO)を樹立し、以下の解析を行なった。1) 大腸癌患者からの治療前及び耐性獲得後のPDOの樹立:未治療の進行大腸癌(Stage IV) 58例よりPDOを樹立した。また、1次治療を行い効果判定でPD(進行)が認められた時点で再度内視鏡検査を行い耐性獲得PDOを4例樹立した。2) PDOにおける染色体分析とCIN-scoreの評価:治療前PDO25例と耐性PDO4例を用いて染色体Gバンド分析を行なった。また、全ゲノム解析データを基に染色体不安定性の定量的評価法を行い、Chromosomal Instability (CIN)-scoreを算出した。治療前PDO25例中CIN-high 10例、CIN-mediate 6, CIN-low 9例であった。耐性獲得後のPDO4例ではCIN-low 2例、CIN-mediate 2例であった。3) 治療前及び耐性PDOの染色体不安定性候補遺伝子の抽出:治療前のPDO25例の全ゲノム解析データを用いて、CIN-score highの治療前PDOのゲノム解析データからアミノ酸変異を伴う変異遺伝子を抽出し、CIN-score-lowのPDOの変異遺伝子を差引いて候補遺伝子を56個を絞り込んだ。このうち、文献検索などを行いCIN候補遺伝子を10個に絞り込んだ。4) PDOにおけるα-tubulin/cadherin1の蛍光標識:CIN-score lowの治療前PDOを対象に、染色体分の微小管を構成するα-tubulinをGFP-Puroで、細胞膜のcadherin1をRFP-Puroでtaggingした。高速レーザー共焦点顕微鏡 を用いて、細胞分裂を多色タイムラプス観察できることを確認した。念の為、別のより強い蛍光色素を用いてHistoneH2bを標識したPDOも作製した。
Colorectal cancer patient-derived organoid(PDO) 1)PDO in patients with colorectal cancer before and after treatment: untreated colorectal cancer (Stage IV) 58 cases PDO 1 treatment, 1 treatment, 1 2)PDO chromosome analysis and CIN-score evaluation: 25 cases of PDO before treatment and 4 cases of PDO resistance were analyzed by chromosome G analysis. A method for quantitative evaluation of chromosomal instability based on the analysis of chromosome and chromosomal instability (CIN)-score was developed. Before PDO treatment, CIN-high 10 cases, CIN-medium 6 cases, CIN-low 9 cases. After tolerance was acquired, PDO4 cases were CIN-low 2 cases, CIN-medium 2 cases were CIN-medium 2 cases. 3)Pre-treatment and tolerance PDO chromosome instability candidate extraction: 25 cases of PDO before treatment, CIN-score high PDO, CIN-score high PDO, CIN-score low PDO, CIN-score high PDO, CIN CIN candidate files are 10 files. 4)PDO α-tubulin/cadherin1 fluorescence marker: CIN-score low PDO before treatment, chromosome microtubule composition α-tubulin GFP-puro, cell membrane cadherin1 RFP-puro tagging High-speed confocal microscopy is used to detect cell division. For the purpose of identification, the use of Histone H2b as a fluorescent pigment
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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