オルガノイドを用いた脂肪由来幹細胞からの超高機能肝細胞様細胞の確立

肝細胞様細胞（HLC）は多能性幹細胞から分化誘導が可能であるが、すべての肝細胞機能を肝細胞と同等に保持するようなHLCはいまだに作製できていない。これまでとは異なる新たなアプローチによって、より肝細胞に近い、超高機能肝細胞様細胞 (Super HLC)の作成方法が必要である。また、Super HLCの他家移植を考慮した際に、その免疫原性の評価も重要となる。本研究では以下の検討内容を明らかにすることを目的とする。1.　ADSCにより誘導されたHLCを“新たな薬剤添加・NH3 precondition”で高機能化し、その高機能HLCと血管内皮細胞とのオルガノイドを形成する。多細胞間の相互作用を人工的に再現することで、従来の分化誘導手法の抜本的改良を試みることができ、我々の目標とするSuper HLCを創出する。2.　ADSCからSuper HLCまでの過程における免疫原性を評価。3.　Super HLCの代謝性肝疾患モデルへの移植。R4年度は、ADSCからの分化誘導の過程,でこのHUVECを混入し、オルガノイドを作成した。Step２から、さらに、HUVECとADSCの細胞数比率は１：３で混入し、通常の3D HLCと比較した。形態学的には通常の3D HLCとオルガノイドに変わりなく、sizeもほとんど同じ程度であった。ただし、細胞集塊のViabilityを蛍光免染で評価したところ、3DHLCの方が、部分的に死細胞が存在しているがことがわかり、オルガノイドでは、細胞集塊中心部であっても、Viabilityは良好であった。肝細胞遺伝子発現では、オルガノイドでAATやCPS1などの発現が3D HLCよりもさらに高発現しており、肝細胞機能に関して、CYP3A4活性がオルガノイドで良好であった。

肝細胞様細胞（HLC）は多能性幹細胞から分化誘導が可能であるが、すべての肝細胞機能を肝細胞と同等に保持するようなHLCはいまだに作製できていない。これまでとは異なる新たなアプローチによって、より肝細胞に近い、超高機能肝細胞様細胞 (Super HLC)の作成方法が必要である。また、Super HLCの他家移植を考慮した際に、その免疫原性の評価も重要となる。本研究では以下の検討内容を明らかにすることを目的とする。1.　ADSCにより誘導されたHLCを“新たな薬剤添加・NH3 precondition”で高機能化し、その高機能HLCと血管内皮細胞とのオルガノイドを形成する。多細胞間の相互作用を人工的に再現することで、従来の分化誘導手法の抜本的改良を試みることができ、我々の目標とするSuper HLCを創出する。2.　ADSCからSuper HLCまでの過程における免疫原性を評価。3.　Super HLCの代謝性肝疾患モデルへの移植。R4年度は、ADSCからの分化誘導の過程,でこのHUVECを混入し、オルガノイドを作成した。Step２から、さらに、HUVECとADSCの細胞数比率は１：３で混入し、通常の3D HLCと比較した。形態学的には通常の3D HLCとオルガノイドに変わりなく、sizeもほとんど同じ程度であった。ただし、細胞集塊のViabilityを蛍光免染で評価したところ、3DHLCの方が、部分的に死細胞が存在しているがことがわかり、オルガノイドでは、細胞集塊中心部であっても、Viabilityは良好であった。肝細胞遺伝子発現では、オルガノイドでAATやCPS1などの発現が3D HLCよりもさらに高発現しており、肝細胞機能に関して、CYP3A4活性がオルガノイドで良好であった。