Development of a new wound treatment with reduced HMGB1 using non-thermal atmospheric pressure plasma

１）プラズマによるHMGB1の還元。HMGB1のプラスミドを使用し、細胞障害性が出ない最適条件（電圧、波長、照射時間）でプラズマ照射を行った。HMGB1はプラズマ照射により分解されてしまい、目的の還元状態に到達することはできなかった。そのため、プラズマに用いるガスをCO2やそのほかのガスに変更し、培養液内で還元作用を起こす計画を進行中。２）培養角化細胞への直接作用の検証。単層培養角化細胞に対しReduced-HMGB1を加えた培養液をプラズマ照射の有無、還元薬使用の有無により4群に分け、細胞の生存率、アポトーシス、細胞増殖、遊走能、分化誘導などを検討し、プラズマ照射による還元型HMGB1の効果を解析した。単層培養角化細胞のスクラッチテストでは、プラズマ照射群で有意に細胞増殖・または遊走能の活性化がみられ、それに加えてHMGB1を添加した群ではさらに有意な結果を得られた。３）通常マウスBalbcの背面に８ｍｍパンチで創傷を作製し、マウスの背部に２秒間プラズマを照射後、HMGB1を含む溶液をパッチテスターで貼付した。プラズマ照射及びHMGB1含有テスターの交換は2日ごとに行い、プラズマ照射群で創傷治癒の促進がみられた。４）poly(I:C)を用いて角化細胞を刺激して炎症性サイトカインを誘導し、プラズマの抗殺菌効果、抗炎症効果を検討し、一定の効果が得られたが、HMGB1含有群を含め有意差はみられなかった。

１）プラズマによるHMGB1の還元。HMGB1のプラスミドを使用し、細胞障害性が出ない最適条件（電圧、波長、照射時間）でプラズマ照射を行った。HMGB1はプラズマ照射により分解されてしまい、目的の還元状態に到達することはできなかった。そのため、プラズマに用いるガスをCO2やそのほかのガスに変更し、培養液内で還元作用を起こす計画を進行中。２）培養角化細胞への直接作用の検証。単層培養角化細胞に対しReduced-HMGB1を加えた培養液をプラズマ照射の有無、還元薬使用の有無により4群に分け、細胞の生存率、アポトーシス、細胞増殖、遊走能、分化誘導などを検討し、プラズマ照射による還元型HMGB1の効果を解析した。単層培養角化細胞のスクラッチテストでは、プラズマ照射群で有意に細胞増殖・または遊走能の活性化がみられ、それに加えてHMGB1を添加した群ではさらに有意な結果を得られた。３）通常マウスBalbcの背面に８ｍｍパンチで創傷を作製し、マウスの背部に２秒間プラズマを照射後、HMGB1を含む溶液をパッチテスターで貼付した。プラズマ照射及びHMGB1含有テスターの交換は2日ごとに行い、プラズマ照射群で創傷治癒の促進がみられた。４）poly(I:C)を用いて角化細胞を刺激して炎症性サイトカインを誘導し、プラズマの抗殺菌効果、抗炎症効果を検討し、一定の効果が得られたが、HMGB1含有群を含め有意差はみられなかった。