核酸ワクチンやゲノム編集遺伝子治療に係る安全性の評価と安全な運用に資する研究

有助于核酸疫苗和基因组编辑基因治疗的安全性评价和安全运行的研究

基本信息

批准号：
22H03343
负责人：
小野竜一
金额：
$ 11.15万
依托单位：
National Institute of Health Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

申請者らは、マウス受精卵においてゲノム編集を実施した際に、およそ２０％の胚の DNAの二重鎖切断 (DSB ; DNA double strand break) 部位（オンターゲットサイト）にレトロトランスポゾンや内在性レトロウィルス、内在性遺伝子の逆転写産物、および CRISPR/Cas9 プラスミドの DNA 断片が挿入されるオンターゲットリスクが存在することを報告している（Ono R., et al., Scientific Reports, 2015）。さらに、エクソソームを介して他動物種より細胞に取り込まれた mRNA の逆転写産物が、オンターゲットサイトに取り込まれる、すなわち、エクソソームを介した遺伝子水平伝搬機構が存在することを明らかにしている（Ono R., et al., Communications Biology, 2019）。この様な非意図配列の挿入（オンターゲットリスク）は、ゲノム編集遺伝子治療の大きな障害となると同時に、COVID-19のワクチンとして使用されている mRNA ワクチンの逆転写産物がゲノム中に挿入される可能性を示唆している。そこで、本研究の目的は、ゲノム編集の際にオンターゲットサイトに非意図配列および mRNA ワクチンの逆転写産物が挿入するオンターゲットリスクの可能性を検討し、それらを回避する手段の開発である。２０２２年度研究においては、デジタルPCRを利用したmRNAの逆転写効率の検出方法の開発を行なった。また、モデルmRNAの合成を行ない、マウス受精卵に実際にモデルmRNAのインジェクションを行なった。

申请人报告说，当在小鼠受精卵中进行基因组进行编辑时，插入逆转转座子，内源性逆转录病毒，内源性基因的逆转录和CRIS CRIS/cas9质粒的DNA碎片的攻击风险大约是胚胎DNA双链片段的20％（the Reportion）（the Reforment）（the）（the Reforment）（the）（the Reforment）（the）。 2015）。此外，已经揭示了已通过外泌体掺入来自其他动物物种的细胞中的mRNA的逆转录记录被纳入靶标的位置，也就是说，存在一种通过外泌体的基因水平传播机制（Ono R.等，et al。，Communications Biology，2019）。这种意外的序列插入（靶标风险）是基因组编辑的基因疗法的主要障碍，并表明可能将用作COVID-19的mRNA疫苗的逆转录物插入基因组中。因此，这项研究的目的是研究在基因组编辑期间将靶向风险的可能性以及要在基因组编辑期间插入目标位点的mRNA疫苗的转录本的可能性，并开发一种避免它们的方法。在2022年的研究中，我们开发了一种使用数字PCR检测mRNA逆转录效率的方法。此外，合成模型mRNA，并实际将模型mRNA注入小鼠受精卵中。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

cfDNAによる毒性評価

使用 cfDNA 进行毒性评估

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
小野竜一;山本雄介;成瀬美衣;田邊思帆里;吉岡祐亮;相崎健一;広瀬明彦;落谷孝広;平林容子;北嶋聡
通讯作者：
北嶋聡

Horizontal Gene transfer mediated by exosomes: a possible new risk for genome editing.

外泌体介导的水平基因转移：基因组编辑可能的新风险。

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
八谷寛;宋澤安;洪英在;Mamun Razib;吉田裕子;Akter Tahmina;Nuamah Gabriel;田島里菜;Lin Jingyi;AI-shoaibi Abubakr;江啓発;中野嘉久;李媛英;松永真章;太田充彦;玉腰浩司;Ryuichi Ono
通讯作者：
Ryuichi Ono

ゲノム編集技術を利用した際の、オンターゲット部位における非意図配列の挿入と、その検出方法の確立

使用基因组编辑技术时在目标位点插入非预期序列及其检测方法的建立