核酸ワクチンやゲノム編集遺伝子治療に係る安全性の評価と安全な運用に資する研究

有助于核酸疫苗和基因组编辑基因治疗的安全性评价和安全运行的研究

• 批准号: 22H03343
• 负责人: 小野 竜一
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03343/
• 关键词: ゲノム編集; mRNAワクチン; レトロトランスポソン; レトロトランスポゾン

申請者らは、マウス受精卵においてゲノム編集を実施した際に、およそ２０％の胚の DNAの二重鎖切断 (DSB ; DNA double strand break) 部位（オンターゲットサイト）にレトロトランスポゾンや内在性レトロウィルス、内在性遺伝子の逆転写産物、および CRISPR/Cas9 プラスミドの DNA 断片が挿入されるオンターゲットリスクが存在することを報告している（Ono R., et al., Scientific Reports, 2015）。さらに、エクソソームを介して他動物種より細胞に取り込まれた mRNA の逆転写産物が、オンターゲットサイトに取り込まれる、すなわち、エクソソームを介した遺伝子水平伝搬機構が存在することを明らかにしている（Ono R., et al., Communications Biology, 2019）。この様な非意図配列の挿入（オンターゲットリスク）は、ゲノム編集遺伝子治療の大きな障害となると同時に、COVID-19のワクチンとして使用されている mRNA ワクチンの逆転写産物がゲノム中に挿入される可能性を示唆している。そこで、本研究の目的は、ゲノム編集の際にオンターゲットサイトに非意図配列および mRNA ワクチンの逆転写産物が挿入するオンターゲットリスクの可能性を検討し、それらを回避する手段の開発である。２０２２年度研究においては、デジタルPCRを利用したmRNAの逆転写効率の検出方法の開発を行なった。また、モデルmRNAの合成を行ない、マウス受精卵に実際にモデルmRNAのインジェクションを行なった。

Applicants ら は, マ ウ ス fertilized egg に お い て ゲ ノ compiling を ム be applied し た interstate に, お よ そ 20% の embryo の の DNA double lock cut off (DSB; DNA double strand break) parts (オ ン タ ー ゲ ッ ト サ イ ト) に レ ト ロ ト ラ ン ス ポ ゾ ン や internality レ ト ロ ウ ィ ル ス, traces of internality 伝 の inverse planning to write a product, お よ び CRISPR/Cas9 プ ラ ス ミ ド の DNA Fragment が scions into さ れ る オ ン タ ー ゲ ッ ト リ ス ク が exist す る こ と を report し て い る (Ono, R., et al., Scientific Reports, 2015). さ ら に, エ ク ソ ソ ー ム を interface し て he species よ に り cells take り 込 ま れ た mRNA の inverse planning write product が, オ ン タ ー ゲ ッ ト サ イ ト に take り 込 ま れ る, す な わ ち, エ ク ソ ソ ー ム を interface し た heritage 伝 sub level 伝 move institutions exist が す る こ と を Ming ら か に し て い る (Ono, R., et al., Communications Biology, 2019. こ の others な not meaning 図 match column の scions into (オ ン タ ー ゲ ッ ト リ ス ク) は, ゲ ノ compiling heritage ム 伝 son treatment の big き な handicap of と な る と に, at the same time COVID - 19 の ワ ク チ ン と し て use さ れ て い る mRNA ワ ク チ ン の inverse planning write product が ゲ ノ ム in に scions into さ れ を る possibility in stopping し て い る. そ こ で, this research purpose の は, ゲ ノ compiling の ム interstate に オ ン タ ー ゲ ッ ト サ イ ト に not meaning 図 match column お よ び mRNA ワ ク チ ン の inverse planning write product が scions into す る オ ン タ ー ゲ ッ ト リ ス ク の possibility を beg し 検, そ れ ら を avoid す る means の open 発 で あ る. 2022 annual research に お い て は, デ ジ タ ル PCR を using し た mRNA の inverse planning working rate の 検 out method の open 発 を line な っ た. ま た, モ デ ル mRNA の synthetic line を な い, マ ウ ス fertilized egg に be interstate に モ デ ル mRNA の イ ン ジ ェ ク シ ョ ン を line な っ た.

项目成果

cfDNAによる毒性評価

使用 cfDNA 进行毒性评估

• 发表时间: 2022
• 作者: 小野竜一;山本 雄介;成瀬 美衣;田邊 思帆里;吉岡 祐亮;相崎 健一;広瀬 明彦;落谷 孝広;平林 容子;北嶋 聡
• 通讯作者: 北嶋 聡

Horizontal Gene transfer mediated by exosomes: a possible new risk for genome editing.

外泌体介导的水平基因转移：基因组编辑可能的新风险。

• 发表时间: 2022
• 作者: 八谷寛;宋澤安;洪英在;Mamun Razib;吉田裕子;Akter Tahmina;Nuamah Gabriel;田島里菜;Lin Jingyi;AI-shoaibi Abubakr;江啓発;中野嘉久;李媛英;松永真章;太田充彦;玉腰浩司;Ryuichi Ono
• 通讯作者: Ryuichi Ono

ゲノム編集技術を利用した際の、オンターゲット部位における非意図配列の挿入と、その検出方法の確立

使用基因组编辑技术时在目标位点插入非预期序列及其检测方法的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: 小野 竜一、田埜 慶子;安田 智;佐藤 陽治;内田 恵理子;平林 容子;北嶋 聡
• 通讯作者: 北嶋 聡