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遺伝性凝固線溶系蛋白欠損症の発症機転としての変異蛋白の細胞内輸送障害

突变蛋白的细胞内转运受损是遗传性凝血和纤溶蛋白缺陷的发病机制

基本信息

批准号：
03265206
负责人：
青木延雄
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルファプラスミンインヒビター(以下α2PI)は、プラスミンによるフイブリン溶解を特異的に効果的に阻害する血漿中プロテアーゼインヒビターである。その先天性遺伝性欠損症の成因の一つとして、1アミノ酸(137番のグルタミン酸)の欠失がある。この1アミノ酸の欠失により、産生されたα2PIの細胞内輸送が障害され、血中に分泌されないため欠損症が生じることを前年度に報告した。本年度は、この137番目のアミノ酸のかわりに、その週辺のアミノ酸を欠失させた場合、産生されたタンパクの細胞内輸送や分泌はどのような影響が及ぼされるかを検討した。117,127,132,147,157,177番のアミノ酸をそれぞれ欠失するように、遺伝子変異を導入して、発現ベクターに導入しCOS7細胞にトランスフエクトした。48時間培養後、培養上清のα2PIと、細胞内α2PIを免疫学的に測定して、α2PI分泌効率を各変異α2PIと正常α2PIについて比較した。一方、48時間培養後、放射活性標識メチオニンでパルスラベルし、時間を追って、細胞内および培養上清中のα2PIを免疫沈降後、SDS電気泳動、オートラジオグラフィーで測定した。127,132,137番のそれぞれのアミノ酸の欠失では、α2PIの分泌は正常α2PIのそれの10%ないし20%に低下していた。147番のアミノ酸欠失では低下は50%にとゞまり、117,157,177番のそれぞれのアミノ酸欠失では、正常にくらべ有意の分泌低下はみられなかった。パルスラベルの実験結果は、タンパクの細胞内輸送が障害され、細胞内に停滞したタンパクが除々に細胞内で崩壊されるため、分泌の低下が起きることを示した。これらの結果は、125附近から150附近の狭い領域がα2PIの細胞内輸送においてタンパク構造上重要な役割を演じていることを示している。

The plasma temperature is higher than the plasma temperature. The plasma temperature is higher than the plasma temperature. The causes of congenital impairment are discussed in detail below. This is the first report on the intracellular transport of α2PI and its secretion in the blood. This year, the 137-year-old woman was found to have lost her position in the intracellular transport and secretion of the disease. 117, 127, 132, 147, 157, 177. The gene was introduced into COS7 cells and found to be present. After 48 hours of culture, the α2PI in culture supernatant and intracellular α2PI were measured immunologically, and the α2PI secretion rate was different from that of normal α2PI. After 48 hours of incubation, radioactivity identification, time tracking, intracellular and α2PI in the culture supernatant, SDS electrophoresis, and radioactivity determination 127, 132, 137, α2PI secretion is normal, α 2 PI secretion is 10% to 20% lower. 147 hours of acid deficiency, 50% of acid deficiency, 117,157,177 hours of acid deficiency, normal hours of acid deficiency, intentionally low levels of acid deficiency The results showed that intracellular transport was impaired, intracellular stagnation was eliminated, and secretion was decreased. The results show that the intracellular transport of α2PI in the narrow region near 125 and near 150 is structurally important.