遺伝性凝固線溶系蛋白欠損症の発症機転としての変異蛋白の細胞内輸送障害

突变蛋白的细胞内转运受损是遗传性凝血和纤溶蛋白缺陷的发病机制

• 批准号: 05253207
• 负责人: 青木 延雄
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05253207/
• 关键词: アルファ2プラスミンインヒビター; 遺伝子変異; 先天性欠損症; 細胞内輸送; 分泌障害; 細胞内輸送障害

アルファ2プラスミンインヒビター(以下α2PI)の先天性遺伝性欠損症の成因の一つとして、1アミノ酸(137番のグルタミン酸)の欠失がある。この1アミノ酸の欠失により、産生されたα2PIの細胞内輸送が障害され、血中に分泌されないため欠損症が生じることを既に報告した。この137番目のアミノ酸を置換したり、その周辺のアミノ酸を欠失させた場合、産生されたタンパクの細胞内輸送や分泌にどのような影響が及ぼされるかを検討した。137番のグルタミン酸に他のアミノ酸が置換するように、また、117,127,132,147,157,177番のアミノ酸がそれぞれ欠失するように、遺伝子変異を発現ベクターに導入しCOS7細胞にトランスフェクトした。48時間培養後、培養上清のα2PIを免疫学的に測定した。一方、培養後、放射活性標識メチオニンでパルスラベルし、時間を追って、細胞内および培養上清中のα2PIを免疫沈降後、SDS電気泳動、オートラジオグラフィーで測定した。137番の置換では、システインに置換した場合を除いては、著しい分泌の低下はみられなかった。127,132,137番のそれぞれのアミノ酸の欠失では、α2PIの分泌は正常α2PIのそれの10%ないし20%に低下していた。147番のアミノ酸欠失では低下は50%にとどまり、117,157,177番のそれぞれのアミノ酸欠失では、正常にくらべ有意の分泌低下はみられなかった。パルスラベルの実験結果は、タンパクの細胞内輸送が障害され、細胞内に停滞したタンパクが徐々に細胞内で崩壊されるため、分泌の低下が起きることを示した。これらの結果は、125付近から150付近の狭い領域がα2PIの細胞内輸送においてタンパク構造上重要な役割を演じていることを示している。

ア ル フ ァ 2 プ ラ ス ミ ン イ ン ヒ ビ タ ー (alpha 2 PI) の congenital legacy 伝 sex owe loss disease causes の の a つ と し て, 1 ア ミ ノ acid (137 times の グ ル タ ミ ン acid) lost の owe が あ る. こ の 1 ア ミ ノ acid の owe lost に よ り, produce さ れ た alpha 2 PI の intracellular delivery が handicap of さ れ secretion and blood に さ れ な い た め owe loss disease が raw じ る こ と を に report both し た. こ の 137's mesh の ア ミ ノ acid を replacement し た り, そ の weeks 辺 の ア ミ ノ acid を owe lost さ せ た occasions, produce さ れ た タ ン パ ク conveying や の cell secretion に ど の よ う な influence が and ぼ さ れ る か を beg し 検 た. 137 times の グ ル タ ミ ン acid に he の ア ミ ノ acid が replacement す る よ う に, ま た, 117127132147157177 times の ア ミ ノ acid が そ れ ぞ れ owe lost す る よ う に, heritage 伝 sub - different を 発 now ベ ク タ ー に import し COS7 cell に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し た. The に determination of <s:1> α2PIを immunology of the culture supernatant after 48 hours of culture た た. Side, after the training, radioactivity mark メ チ オ ニ ン で パ ル ス ラ ベ ル し, time を chase っ て, intracellular お よ び の alpha in the culture supernatant after 2 PI を immune sink, SDS electric 気 swimming, オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ ー で determination し た. In the 137th <s:1> replacement of で った and システ システ に に replacement of <s:1> た, を in addition to て て った, the secretion of <s:1> is low, and the secretion is also low, みられな みられな った った. 127132137 times の そ れ ぞ れ の ア ミ ノ acid の owe lost で は, alpha 2 PI PI の secretion は normal alpha 2 の そ れ の 10% な い し 20% low に し て い た. 147 times の ア ミ ノ acid owe で loss 50% low は は に と ど ま り, 117157177 times の そ れ ぞ れ の ア ミ ノ acid owe lost で は, normal に く ら べ intentionally の low secretory は み ら れ な か っ た. パ ル ス ラ ベ ル の be 験 results は, タ ン パ ク の intracellular delivery が handicap of さ れ, stagnation of intracellular に し た タ ン パ ク が xu 々 で に cell collapse 壊 さ れ る た め, low secretory の が き る こ と を shown し た. こ れ ら の results は, pay nearly 125 か ら 150 narrow い field pay close の が alpha 2 PI の intracellular delivery に お い て タ ン パ ク cut を play important な service in its construction じ て い る こ と を shown し て い る.

项目成果

Nobuo Aoki et al.: "Human α_2-plasmin inhibitor" Methods in Enzymology. 223. 185-197 (1993)

Nobuo Aoki 等人：“人类 α_2-纤溶酶抑制剂”酶学方法 223. 185-197 (1993)。

Nobuo Aoki: "alpha 2 plasmin inhibitor and its clinical significance" Asian Medical Journal. 36. 557-565 (1993)

青木伸夫：《α2纤溶酶抑制剂及其临床意义》亚洲医学杂志。

Atsushi Kato et al.: "Localization of the human α_2-plasmin inhibitor gene(PLI) to 17p13" Cytogenetics and Cell genetics. 62. 190-191 (1993)

Atsushi Kato 等人：“人类 α_2-纤溶酶抑制剂基因 (PLI) 定位于 17p13”《细胞遗传学和细胞遗传学》62. 190-191 (1993)。

Shigeo Toyota et al.: "Secretion of α_2-plasmin inhibitor is impaired by amino acid deletion in a small region of the molecule" Journal of Biochemistry. 115. 293-297 (1994)

Shigeo Toyota 等人：“α_2-纤溶酶抑制剂的分泌因分子小区域的氨基酸缺失而受损”《生物化学杂志》115. 293-297 (1994)。

Osamu Miura et al.: "Intracellular transport-deficient mutants causing hereditary deficiencies of factors involved in coagulation and fibrinolysis" Thrombosis and Haemostasis. 69. 296-297 (1993)

Osamu Miura 等人：“细胞内转运缺陷突变体导致参与凝血和纤维蛋白溶解的因子遗传性缺陷”血栓和止血。