大腸菌蛋白質分泌の分子機構

大肠杆菌蛋白分泌的分子机制

• 批准号: 03264102
• 负责人: 水島 昭二
• 金额: $ 18.43万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03264102/
• 关键词: 蛋白質の分泌; 蛋白質の膜透過; Sec蛋白質; SecY; SecE; シグナルペプチド; 変異解析; SecA

1.生化学を中心とした研究(水島グル-プで行われた研究)(1)精製したSecA,SecE,SecYより膜透過活性を再構成することに成功した。SecD,SecFも精製したが、これらは再構成膜透過活性を促進しなかった。(2)SecEのC末端領域がSecYとの相互作用に関与していること、C末端領域のみでSecE活性を示すことを見い出した。(3)再構成された活性はATP依存性であった。しかし、プロトン駆動力依存性を見ることはできなかった。(4)シグナルペプチドのN末端正荷電と中央疎水領域が機能的に関連しあっていることを見い出した。(5)タンパク質膜透過装置は直鎖ポリペプチド鎖以外の残基をも許容しうることを見い出した。2.遺伝学を中心とした研究(伊藤グル-プで行われた研究)(1)優性欠損SecY変異(SecY^<ーd>1:細胞質領域5の3アミノ酸基欠失)および多数のCs分泌欠損secY変異を分離し、塩基配列変化を決定した。(2)SecY^<ーd>1の分泌阻害を回復させるsecY内部のリンカ-挿入変異の分離マルチコピ-状態で回復させるsecY以外の遺伝子領域ydrの同定を行った。(3)アルカリ性ホスファタ-ゼのSS結合の形成・foldingに必要な新たな遺伝子ppfAを同定した。(4)膜タンパク質の「透過停止配列」のC末端側に融合したPhoAを膜透過させてしまう変異stdを分離し、それが遺伝子ftsHの変異である事を示した。

1. Biochemistry Research Center (Mizushima Research Center)(1) Purification of SecA,SecE,SecY Membrane Permeability Restructuring SecD,SecF, Refined, Restructured Membrane Permeability Promotes Activity. (2) The interaction between SecE and C-terminal domain is closely related to SecE activity. (3)ATP dependence of recombination activity. The power dependence of the system is not easy to see. (4)The N-terminal positive charge and the central water field are functionally related. (5)The plasma membrane is permeable to residues other than those contained in the molecule. 2.(1) Suboptimal SecY variation (SecY^<d>1: Cytoplasmic domain 5 and 3) Suboptimal (2)SecY^<d>1 secretion block recovery, secY internal separation, separation, state recovery, secY external separation, ydr synchronization. (3)A new genetic protein ppfA necessary for the formation and folding of the (4)C-terminal fusion of the membrane quality and the difference between the membrane quality and the membrane quality are shown.

项目成果

Ito,K.and Akiyama,Y.: "In vivo analysis of integration of membrane proteins in Escherichia coli." Mol.Microbiol.5. 2243-2253 (1991)

Ito,K. 和 Akiyama,Y.：“大肠杆菌膜蛋白整合的体内分析。”

Masashi Kato: "In Vitro translocation of secretory proteins possessing no charges at the mature domain takes place efficiently in a protonmotive" J.Biol.Chem.267. 413-418 (1992)

Masashi Kato：“成熟结构域不带电荷的分泌蛋白的体外易位在质子动力中有效发生”J.Biol.Chem.267。

Sakaguchi,M.,Ueguchi,C.,Ito,K.,and Omura,T.: "Yeast gene which suppresses the defect in protein export of a secY mutant of E.coli." J.Biochem.109. 799-802 (1991)

Sakaguchi,M.、Ueguchi,C.、Ito,K. 和 Omura,T.：“抑制大肠杆菌 secY 突变体蛋白质输出缺陷的酵母基因。”

Katsuko Tani: "A chemically cross-linked nonlinear proOmoA molecule can be translocated into everted membrane vesicles of Escherichia coli in the presence of the proton motive force." FEBS Letters. 285. 127-131 (1991)

Katsuko Tani：“在质子动力存在的情况下，化学交联的非线性 proOmoA 分子可以转移到大肠杆菌的外翻膜囊泡中。”

Shoji Mizushima: "In vitro biochemical studies on translocation of presecretory proteins across the cytoplasmic membrane of Escherichia coli." Methods in Cell Biol.34. 107-146 (1991)

Shoji Mizushima：“关于前分泌蛋白穿过大肠杆菌细胞质膜易位的体外生化研究。”