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アデノシンデアミナ-ゼ欠損重症複合免疫不全症の遺伝子治療の研究

腺苷脱氨酶缺乏型重症联合免疫缺陷病的基因治疗研究

基本信息

批准号：
03265208
负责人：
伊藤和彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ADA欠損を病因とする重症複合免疫不全症の本邦1症例につき遺伝子解析を行った。患児、父親、母親、健康人コントロ-ルからEBウイルスでトランスフォ-ムしたBリンパ芽球様細胞株(LCL)を樹立して実験材料とした。ADA活性は患児LCLには無く、父及び母LCLではコントロ-ルの半分以下であった。患児LCLのADAcDNAの1クロ-ンの塩基配列分析から、エキソン7の欠失およびアミノ酸配列に変化のない629GのAへの置換が発見された。mRNAによるribonuclease protection assayで、患児ADAmRNAはすべてエキソン7を欠失し、父のは正常とエキソン7欠失から成り、母のは正常だけであった。エキソン7欠失は父から遺伝し、母由来の異常遺伝子は本法では検出不可能な不安定mRNAを発現しているか、または発現しないと結論される。エキソン7欠失の原因となるADA遺伝子異常を調べた。エキソン6からエキソン8にわたるADA遺伝子DNAを増幅し、クロ-ニングして塩基配列を決定した。8中6クロ-ンで5'スプライスサイトの異常、即ちイントロン7の5'側第一塩基GのAへの置換が発見された。他の塩基配列には異常が無かったので、この点突然変異に起因するスプライシング異常によってエキソン7の欠失が起きると結論された。本邦ADA欠損症例での初めての遺伝子分析であり、外国では報告されていない遺伝子異常であった。本疾患は遺伝子治療の対象として最適と考えられている。これを進めるためには異常ADA遺伝子の解析が不可欠である。

The etiology of ADA deficiency and the analysis of gene in 1 case of severe multiple immunodeficiency syndrome in our country Children, fathers, mothers and healthy individuals were selected to establish LCL cell lines. ADA activity in LCL is less than half of the parent's LCL. The base alignment analysis of ADAcDNA in children was carried out. The results showed that 629G and A were replaced by 629G in ADAcDNA in children. mRNA ribozyme protection assay, ADAmRNA in the affected child, normal in the parent, normal in the parent. 7. It is impossible to detect the expression of unstable mRNA due to the absence of the gene, the origin of the abnormal gene, and the conclusion that 7. The reason for the failure of ADA is abnormal. The DNA of ADA gene was amplified and the nucleotide sequence was determined. 8 in the 6-point 5'position of the abnormal, that is, the 5' side of the first group G of the A substitution is found There is no abnormality in the arrangement of the base, and the cause of the sudden change of the point is the abnormality of the base. Local ADA deficiency cases are reported as early as possible, and foreign countries are reported as abnormal. This disease is the most suitable treatment for children. The analysis of ADA gene can not be missed.