ミトコンドリア異常症における患者形成機構の細胞遺伝学的解析

线粒体疾病患者形成机制的细胞遗传学分析

• 批准号: 04260225
• 负责人: 桃井 真里子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04260225/
• 关键词: ミトコンドリア異常症; ミトコンドリアDNA; MELAS

ミトコンドリア異常症における病態の特性は、変異遺伝子が増幅することにより患者を形成することである。従って、患者形成機構の解析には変異ミトコンドリア遺伝子(mtDNA)の患者、患者細胞における動態の解析が重要である。本研究では、(1)患者におる変異mtDNAの組識内配状況を解析し、患者形成機構を推測した。さらに、(2)細胞内病態の修飾機構の可能性を検討した。(1)ミトコンドリア異常症の1病型であるMELASの患者4名より、多数の筋細胞をクローン化し、各々のクローンのmtDNAを3243変異に関して定量解析した。32P標識プライマーを用いて、3243領域を含むフラグメントをPCR増幅し、Apal処理後、ポリアクリルアミドケル上でFujix BAS2000で定量した。10歳代の患者3名においては、変異mtDNA/正常mtDNA+変異mtDNAが0-20%近傍の細胞群と80%近傍の細胞群に分かれ、50%近傍の細胞の稀であった。20歳で末期の患者より得た筋細胞では、80%近傍の細胞群はピークを形成せず、むしろ、中間の割合を示す細胞があった。以上は、患者においては、少なくとも筋組識においては、変異mtDNAは各細胞内ではstochastic segregationに近い状態を経て分配されていること、さらに、完全なsegregationには至っていないこと、を意味している。従って、ほとんどの細胞内では割合の差はあるが、正常mtDNAと変異mtDNAが共存する状態にあり、正常mtDNAの発現量が細胞固有の閾値以上を満たしていれば、変異mtDNA存在下でも正常状態であることを推定させた。筋組識で変異mtDNAが60%であっても、筋症状を発現しないことは、各細胞内でヘテロプラスミー状態であることから理解された。(2)細胞内ヘテロプラスミーであることが(1)により解析された。ミトコンドリア遺伝子の転写活性を制御する機構の一つであるTF1の変動を解析した。TF1は、核遺伝子支配のDNA結合蛋白であり、mtDNAに結合することによりmtDNAの転写が開始される。核遺子発現を制御することでTF1発現が修飾され、mtDNA転写活性が修飾される可能性を、上記の筋細胞において検討した。RA、D3、のうち、RA10^<-9>以上で、TF1 mRNAが増加する事をRTPCRで検出した。この条件下でのmtDNA転写量の検討は進行中である。以上、MELASにおける変異mtDNAが細胞内ヘテロプラスミーであり、病態の修飾には正常遺伝子の発現制御が重要な視点であることが判明した。

The abnormal characteristics of the disease, the abnormal characteristics of the disease The analysis of patient formation mechanisms is important for the analysis of the dynamics of mtDNA in patients and patients. This study is based on the following aspects: (1) analysis of mtDNA structural identity in different patients, and speculation of patient formation mechanisms. (2) The possibility of pathological modification mechanism in cells is discussed. (1)A quantitative analysis of mtDNA variation in 4 patients with MELAS was performed. 32P identification, 3243 field identification, PCR amplification, Apal treatment, classification, quantification, Fujix BAS2000 Three patients aged 10 years old had abnormal mtDNA/normal mtDNA+ abnormal mtDNA, 0-20% of the nearby cell population, 80% of the nearby cell population, and 50% of the nearby cell population. At the end of the 20th century, 80% of the adjacent cell populations were found to be undifferentiated, undifferentiated, and undifferentiated. The above is a case of partial or complete mitochondrial DNA segregation in the near state of each cell. The difference between normal mtDNA and heterozygous mtDNA in the cell is estimated to be between normal mtDNA and heterozygous mtDNA. 60% of mtDNA is recognized, and the symptoms of the tendon appear. (2)Cell phone number: 1 The activity of TF1 is analyzed by a mechanism that controls the activity of TF1. TF1 DNA binding protein, mtDNA binding protein, mtDNA binding protein The possibility of TF1 gene expression modification and mtDNA coding activity modification was discussed in the context of the study of mitochondrial DNA expression. RA, D3, RA10^or <-9>more, TF1 mRNA increase, RTPCR detection Under these conditions, the mtDNA content is still in progress. The above, MELAS, different mtDNA, and intracellular gene expression, pathological modification, and normal gene expression control important point of view

项目成果

Oguro,N.: "The effect offruzine to cytochrome a cxidase cytochenistry on cells in monolager cuiture." Acta Histochenuca Cytochemica. 25. 523-531 (1992)

Oguro,N.：“fruzine 对细胞色素氧化酶细胞化学对单一啤酒培养物细胞的影响。”

Kobayashi,Y.: "The mutant genes in mitochondual myopsthy,enuphopathy,lactic acidosis and strokelike epssohes are selictivily amolivied throuyh genecations" G.Inh.Metab.Dis. 15. 803-808 (1992)

Kobayashi,Y.：“线粒体肌病、中风病、乳酸性酸中毒和中风样发作中的突变基因是通过基因选择性地去除的”G.Inh.Metab.Dis。