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起始部欠損SV40・DNA導入によるジストロフィー筋細胞株の樹立と変異形質の検出

通过引入起源缺陷的 SV40/DNA 建立营养不良性肌肉细胞系并检测突变性状

基本信息

批准号：
61570465
负责人：
桃井真里子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Duchenne型筋ジストロフィー症(DMD)の変異形質・病態検索を目的としてDMD筋のクローン化を試み、成功した。(1) 長期培養困難である増殖性の低い筋細胞をクローン化する方法として、癌遺伝子を細胞に導入し形質転換せしめて後クローン化する分子生物学的方法を用いた。ヒト細胞を効率良く形質転換し、かつ時に分化機能を保時する事のある、複製起始部欠損SV40・DNA(oriと略す)を生検骨格筋初代培養系細胞にカルシウム・リン酸法で導入した。(2) 形質転換細胞クローンは約50作成され、内9個が筋芽細胞様形態を示し、残りは線維芽細胞様であった。前者を一定の無血清培地に培養する事により筋細胞特有の多核細胞化、筋管細胞形成、筋型CKisomerの発現など、一定程度の分化形質の発現をみた。(3) 形質転換細胞クローンは二倍増殖時間は8ー9時間と著しい高増殖性を示し、均一大量の筋細胞を得る事を可能とした。(4) 正常筋細胞に比して増殖性の悪いDMD筋細胞も、同様の方法でクローン化された。クローン化DMD筋細胞は正常筋クローンに比して幅広い夛核細胞化を示し、筋管形成は不完全であった。以上、ヒト骨格筋細胞は【ori^-】・DNA導入によりクローン化し得る事を示した。これは均一な筋細胞を常に無制限に供給し得る系であるばかりでなく、分化誘導により分化形質の検索も可能にした。DMDクローンも同様にして確立され、不完全分化が示唆されたことは、DMDが成熟筋の変性のみならず、筋細胞の分化・成熟障害を一次的変異形頂としている可能性を示唆した。

Duchenne type tendon syndrome (DMD) is a heteromorphic disorder and pathological condition. The purpose is to try and succeed. (1) Long-term culture of proliferative low-density cells is difficult, and the method of converting them into cancer cells The method of molecular biology is used to convert cells after introducing them into morphological changes. ヒトcell をGood efficiency くmorphological transformation しかつtime にdifferentiation function をtimekeeping する事のある、Replication origin defect SV4 0・DNA (origami) was introduced into primary cultured cells of 検bone lattice by the acidic method. (2) Approximately 50 morphologically modified cells are produced, including 9 muscle bud cells. The former is a certain serum-free culturing method, which results in the multinucleated cellularity, muscle tube cell formation, muscle-type CKisomer, and differentiated morphology to a certain extent that are unique to muscle cells. (3) Morphological change of cells can double the growth time of 8 to 9 times and show high proliferative properties, and it is possible to obtain a uniform large number of muscle cells. (4) The normal muscle cells are different from the proliferative DMD muscle cells, and the same method is used to change the muscle cells. The normal muscle cells of DMD tendon cells have become smaller than normal tendon cells, and the muscle cells have not formed completely yet. Above, the ヒトbone lattice cellsは【ori^-】・DNA is introduced into the によりクローンしgetshinshiした.これは Uniform Tendon Cells をNormal にUnrestricted にSupply しget る Line であるばかりでなく, Differentiation Induction により Differentiation morphological の検SO もpossible にした. DMD クローンも同様にして Established され, Incomplete Differentiation が Show Instigation されたことは, DMD がMature Muscle のThe possibility of abnormality, differentiation and maturation impairment of tendon cells and the possibility of abnormality are all indicated.