大腸菌+RNA遺伝子の重複機構

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本研究のスタートまでに、1(大腸菌の重復したtRNA遺伝子(doublet)が、不等交互によって、Singletやtripletになることを証明した。2)、tRNA遺伝子内に挿入したトランスポゾンの遺伝子組換えに対する効果を調べた。3)大腸菌ゲノム中1個しかないtRNA^<Trp>遺伝子のナンセンスサプレッサーへの変異を調べ、rrnオペロン間の組換えによって、rrnオペロン間に存在するtRNA^<Trp>遺伝子が倍化し、そのうちの1個がナンセンスサプレッサーに変異していることなどを明らかにしてきた。これらの研究を基にして、本研究課題を遂行するため、本年度はその実験系の確立に努めた。大腸菌のtRNA遺伝子はサプレッサーマーカーとして遺伝的標識が可能であり、その活性はサプレッサーtRNAの遺伝子の数と比例関係にある。このことに着目して、SingletのサプレッサーtRNA遺伝子を運ぶラムダファージの作成を試み、この遺伝子の重複が容易に判別できるように工夫した。すなわち、大腸菌のロイシン・オーカーサプレッサーtRNA遺伝子をλgt・su^+boc S^+amyを得た。作製したファージをlacZ^-_<oc>変異をもつ指示菌と色素を含む平板培地にプレートすると、プラークの着色程度によって、遺伝子の重複が判定できると考えられる。こうした大腸菌とファージの実験系の作製に加えて、大腸菌ゲノムに1個しかないtRNA遺伝子の重複を直接知る方法として、PCRの利用を考案し、実験を行なった。