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大腸菌におけるエネルギー生産系の遺伝子の総検索

全面寻找大肠杆菌中的能量生产系统基因

基本信息

批准号：
05259211
负责人：
井口八郎
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌のvisA(hemH)遺伝子を欠失したミュータントは全くヘムを作れないが、グルコースを含む完全培地上ではminute colonyを作る。この表現型に着目して、ヘミンを培地に加え、プロトヘム以前のステップに欠損が生じたものは排除するようにした上で、visA欠失株と同様の表現型を示すミュータントの分離を試みた。この場合、大腸菌はヘミンの透過しないので、まずhemin-permeable mutant(visA欠失株よりヘミン添加の培地上で大きなコロニーを作るもの)を分離し、この株を用いてNTGで処理した後、ヘミン添加のトリプトン培地中でペニシリン・スクリーニングにかけた。生き残ったバクテリアをヘミン添加のLBプレートにまき、暗所、37℃で72時間保温後、minute colonyを単離した。次に大腸菌ゲノムのほぼ全域をカバーする小原らの整列クローンで相補性を調べた。相補したクローンにつき遺伝子地図から新しい遺伝子であるかどうかを判定すると共に、サブクローニング、塩基配列決定などの遺伝子解析を行なった。その結果、32箇所にマップされたミュータントのほとんどが新しいものであり、中には大腸菌染色体地図の複数箇所にマップされるものも見い出された。このうちミュータント#2-20と#1-10について詳しい解析を進めたが、#2-20はリボフラビン合成に関与する遺伝子のribHにホモロジーがあり、また#1-10はB・subtilisのgerC遺伝子とホモロジーがあった。この様に本研究で得たミュータントの多くはエネルギー代謝と直接関係をもつ遺伝子の変異したものであり、今後大腸菌細胞のエネルギー系関連遺伝子の全体像を明らかにするため役立つものと考えられる。

The fungus visA (hemH) is missing, and the whole body of the fungus is not available. It contains the complete training of the minute colony on the ground. The table type shows that the missing plants are the same as those in the same table, and that the missing plants of visA are the same as those in the same table. After the treatment of bacteria, bacteria, For raw and disabled materials, add LB, dark room, heat preservation at 37 ℃ for 72 hours, and then the minute colony will be isolated. In the second place, there is a lot of bacteria in the world, and the whole line is similar. This is the first time to determine whether the data is common or not, and that the base column determines that the child parses the row. The results of the experiment, the results of the 32-year report, the results of the 32-year-old, the results of the results, the results of the results, the results and the results. You need to know that you need to learn more about the problem. You need to know how to synthesize your ribH. You need to know how to do this. You need to know how to synthesize your information. You need to know that you have a problem. You need to know that you have a problem. You need to know how to do this. You need to know how to do this. The results of this study are as follows: in this study, there are many problems in this study. in this study, the results of this study are as follows: in this study, the results of this study are as follows: in this study, the results of this study are as follows.