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酵素特異性の改変-FeキレテースからMgキレテース

酶特异性的修改 - 从铁螯合酶到镁螯合酶

基本信息

批准号：
09878151
负责人：
井口八郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878151/
关键词：
大腸菌ヘム生合成プロトポルフィンIX フェロキレテースマグネシュームキレテースコプロポルフィリノーゲン・オキシダーゼプロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼキメラ遺伝子プロトポルフィリンIX フェロキレテ-スマグネシューム・キレテ-ス hemH遺伝子イネ

项目摘要

ヘム生合成の最終段階でプロトポルフィリンIXに鉄を挿入する酵素であるフェロキレテースを遺伝子工学的に改変し各種のミュータントを分離して、この酵素の機能ドメインに関する情報を得ると共に、マグネシュームを挿入するようになったミュータントの分離を目的として研究した。1)プロトポルフィリンIXに鉄以外の原子を挿入した場合、そうした大腸菌細胞を選別出来るような系の作製を試みたが、目的に堪えるような選別系は作れなかった。2)光合成生細菌のマグネシューム・キレテース遺伝子と大腸菌のフェロキレテース遺伝子のキメラ遺伝子を人工的に作製する実験を続行している。活性あるキメラ遺伝子はまだ得ていない。3)機能ドメインを知るため、ポルフィリンを基質として働く酵素をいろんな生物種について遺伝子レベルから比較検討した。たとえば、イネのフェロキレテース遺伝子(cDNA)、ダイズのプロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼの遺伝子(cDNA)のクローン化に成功し、塩基配列を調べてポルフィリン環認識のコンセンサス配列などを検討した。4)大腸菌のフエロキレテースやプロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ(PPOX)遺伝子の欠失株を作製し、これらの欠失株からの復帰株の分離を試みた。プロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ遺伝子の欠失株から復帰株の分離に成功し、当該変異遺伝子の同定を行った結果、このミュータントではポルフィリン生合成経路において、プロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ遺伝子の一段階前の酵素であるコプ口ポルフィリノーゲン・オキシダーゼ(CPOX)遺伝子のプロモーター領域に変異があり、コブ口ポルフィリノーゲン・オキシダーゼの多量生産がプロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ遺伝子の欠失を補っていることがわかった。

The final stage of ヘムsynthesis is でプロトポルフィリンIX に鉄をinsert するenzymeあるフェロキレテースを伝子工学的に Change変し Various のミュータントをSeparationして、このzymeのfunctionドメインに关するinformationをgetると公に、マグネシュームをinsert するようになったミュータントのseparation をpurpose として research した. 1) In the case of inserting atoms other than プロトポルフィリンIXに鄄, coliform cells Choose out the るような-type no production を trial みたが, and the purpose にkan えるようなSelect the other-type は作れなかった. 2) Photosynthetic bacteria and coliformsする実験を続行している. The activity is active. 3)Functional filter material Enzyme をいろんなbiotic species について缝子レベルからComparative 検question した.たとえば, イネのフェロキレテース缝子(cDNA),ダイズのロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼの缝Sub(cDNA) のクローン化に成し, 塩组组组组べてポルフィリン环cognition のコンセンサス配arrayなどを検曰した. 4)Eliform coliform bacteria POX) これらのowed loss of strains and これらの owes a loss of strains and is a complex and separated strain.プロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ伝子の无码氋The separation of the complex strains will be successful, and the result will be the same as the original one. .ロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ伝子の一step前の fermentation Primrose であるコプ口ポルフィリノーゲン・オキシダーゼ(CPOX )のプロモーター区に変differentがあり、コブ口ポルフィリノーゲン・オキシダーゼのmass productionがプロトポルフィリンノーゲン・オキシダーゼ伝子の无不了を综合っていることがわかった.