大腸菌tRNA遺伝子の重複機構

大肠杆菌tRNA基因的复制机制

• 批准号: 05255202
• 负责人: 井口 八郎
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05255202/
• 关键词: 大腸菌; イソロイシンtRNA; サプレッサー活性; tRNA遺伝子; Cscl密度勾配遠心; doublet tRNA遺伝子; PCR法; 遺伝子重複

大腸菌のイソロイシン(AUA)tRNA遺伝子はゲノム上に一個しか存在しないが,このtRNA遺伝子をアンバーサプレッサーに換えてラムダファージにクローン化した。このファージ粒子の密度は野生型ラムダファージのそれに近く,サプレッサー活性は弱いのでX-Galプレートで薄いブループラークを作る。このファージの増殖中にtRNA遺伝子の重複が生じたとすると,ファージ粒子密度がわずかに増加すると共に,サプレッサー活性は倍になりXGalプレートで濃いブループラークを作ることが期待できる。実際にtRNA遺伝子1個分の重複が検出できることを示す対照実験として,グルタミンtRNA遺伝子のsingletとdoubletの二種類のファージを混合し(10^9:10^4)Cscl密度勾配遠心にかけ,わずかに重いフラクションの再遠心をくり返してtRNA遺伝子1個分の重複(doublet)の検出を試みた。この場合,doublet tRNA遺伝子にはオーカーマーカーをつけ,ファージにもプラークタイプや宿主域マーカーをつけて,singletをもつものと区別できるように工夫しておいた。最適の遠心条件を調べたのち,4回の遠心をくり返すことで,対照のdoublet tRNA遺伝子をもつファージをプラークの色の違いで見い出すことに成功した。イソロイシン(AUA)tRNA遺伝子をもつファージ10^9粒子を同時に遠心し,サプレッサー活性が強いと判定したプラーク12個を分離した。次にこれらのファージがもつtRNA遺伝子がdoubletであるかどうかをPCR法によって調べた。その結果,12個ともdoublet遺伝子に対応するようなDNAフラグメントの増幅は見られなかった。よって通常のファージ調製液にはdoublet tRNA遺伝子をもつものは10^<-5>より低い頻度しか存在しなく,tRNA遺伝子が特に重複を起こしやすいことは見い出せなかった。

Escherichia coli tRNA (AUA) tRNA remains, The このtRNA legacy 伝子をアンバーサプレッサーにchanges to えてラムダファージにクローン化した. Density of particles, density of wild type particlesッサーActive weak いのでこのファージの multiply にtRNA legacy 伝子の Repeat が生じたとすると, ファージ particle density がわずかに嗗加すると公に,サプレッサーACTIVE は TIMES になり実记にtRNA remains 伝子1分の Repeatが検出できることをshowす対殟験として,グルタミンtRNA 缝子のsingletとdoubletの二级のファージをmixし(10^9:10^4)Cscl density matching telecentric にかけ,わずかに重いフラクションのZaiyuanxin をくり回してtRNA 伝子 1分の Repeat (doublet) の検出の検出みた.このoccasion, doublet The host domain of tRNA is the host domainマーカーをつけて,singletをもつものとdifferentiationできるように工夫しておいた. Optimum telecentric condition べたのち, 4 times telecentric をくり return すことで, 対光のdoublet tRNA remains the same as the original one.イソロイシン(AUA)tRNA 缝子をもつファージ10^9 particlesをsimultaneouslyに心し,サプレッサーActivityがstrongいとdeterminationしたプラーク12をSeparationした. The second にこれらのファージがもつtRNA legacy 伝子がdoublet であるかどうかをPCR method によって Adjustment べた. As a result, 12 ともdoublet legacy 伝子に対応するようなDNA フラグメントのincreased width は见られなかった.にはdoublet tRNA legacy をもつものは10^<-5>よりlow frequency and existenceく, the tRNA remains the same as the original one.

项目成果

K.Miyamoto et al.: "Nucleotide sequences of cDNA Clones encoding ferrochelatase from barley and cucumber" Plant Physiol.(印刷中).

K. Miyamoto 等人：“编码来自大麦和黄瓜的亚铁螯合酶的 cDNA 克隆的核苷酸序列”Plant Physiol。

M.J.Rogers et al: "The recognition of E.coli glutamine tRNA by glutaminyl-tRNA synthetase" Nucl.Acids Res.Symp.Series. 29. 211-214 (1993)

M.J.Rogers 等人：“谷氨酰胺酰-tRNA 合成酶对大肠杆菌谷氨酰胺 tRNA 的识别”Nucl.Acids Res.Symp.Series。

H.Yang et al.: "Behairoral,responses to light of an E,coli mutant accumulating protoporphylin IX" J.Bacteriol. (発表予定).

H. Yang 等人：“Behairoral，积累原卟啉 IX 的大肠杆菌突变体对光的反应”J. Bacteriol。

Y.Komine et al.: "A tRNA-like structure found in 10Sa small RNA from Escherichia Coli" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (発表予定).

Y. Komine 等人：“在大肠杆菌的 10Sa 小 RNA 中发现的 tRNA 样结构”Proc.Natl.Acad.Sci.USA（待提交）。

M.Kitabatake & H.Inokuchi: "A sinplified method for generating step-wise delctions using PCR" Gene. 123. 59-61 (1993)

北畠先生