平滑筋ミオシン軽鎖リン酸化酵素のアクチン結合と収縮制御

平滑肌肌球蛋白轻链激酶的肌动蛋白结合和收缩控制

• 批准号: 04263202
• 负责人: 桑山 秀人
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04263202/
• 关键词: ミオシン軽鎖キナーゼ; ライオトニン; 平滑筋; アクチン; カルデスモン; カルモジュリン

平滑筋収縮では,収縮制御蛋白質ライオトニン(Ln)によりアクチン側から制御がおこなわれるとするライオトニン説とCa^<2+>-カルモジュリン依存性のミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)によるミオシン軽鎖のリン酸化を介してミオシン側からおこなわれるというリン酸化説とが提出させた。両仮説の是非を明確にするために我々は平滑筋抽出試料からMLCK活性とLn活性をそれぞれ分離することを精力的に試みた。トリ砂襄の場合は,蛋白質としては130kDa成分のみが得られ,両活性を分離することはできなかった。一方,牛胃および牛大動脈抽出液からはLnとしては155kDa,MLCKとしては130kDaの2つの蛋白質成分が得られたが,活性の分離が不完全であった。牛の2つの成合に違いをアミノ酸配列から調べたところ130kDaは155kDaのN末端側約25kDa部分が内因性プロテアーゼにより切断されたものであり,155kDa成分にはミオシンフィラメント結合モチーフ,MLCK活性モチーフおよびCaM結合モチーフの存在が確認された。この結果からLnとMLCKは同一分子であることがわかった。cDNAからの配列によれば155kDa成分にN末端部分のアミノ酸80残基は,平滑筋・非筋MLCKに共通の保存配列ドメインで,カルテスモンによる収縮制御に不可欠なCaM・アクチン結合ドメインと類以の配列を含んでいた。また,このドメイインはアクチント強く結合することが示された。平滑筋MLCKのN末端部分はアクチン側からの制御に重要と考えられる。牛平滑筋ではアクチン結合ドメインに続き,プロテアーゼで切られ易い部分がありそこで切られてできる130kDa成分は,MLCK活性は保存されているが,アクチンとの結合能は失われている。一方トリ砂襄では分解酵素で切られる部分が欠損しているために,一つの橋LCKのみしか得れらなかったと解釈できる。

Smooth muscle contraction, contraction control protein ライオトニン (Ln) によりアクチンlateral かがおこなわれるとするライオトニン说とCa^<2+>-カルモジュリンdependency のミオシン軽 lock キナーゼ(MLCK) によるミオシン軽lock のリンAcidification を Introduction してミオシンlateral からおこなわれるというリンAcidification とがさせた.両仮说の真义にするために我々は smooth muscle extraction sample からMLCK activity とLn activity をそれぞれisolation することをenergetic にtestみた. Toru sand 脄の occasion は, protein と し て は 130kDa ingredient の み が ら れ, 両 active を separation す る こ と は で き な か っ た. 155kDa, MLCK The protein component of ては130kDaの2つのhas been obtained, and the separation of activity has been incomplete.牛の2つの成合にviolationいをアミノacid coordination sequence べたところ130kDaは1 Approximately 25kDa part of the N-terminal side of 55kDa is cut off due to the endogenous peptideれたものであり,155kDa ingredient にはミオシンフィラメント Combined モチーフ, The presence of MLCK activity in CaM-binding CaM has been confirmed.このRESULTSからLnとMLCKはThe same moleculeであることがわかった. The cDNA sequence contains 155kDa components, the N-terminal part contains 80 residues of amino acid, and the smooth rib and non-gluten MLCK share the same protection. The storage arrangement of the ドメインで, the カルテスモンによるshrinking control is not due to the なCaM・アクチン combined with the ドメインと class to the のalignment を有んでいた.また,このドメイインはアクチントstrongくcombineすることがshowされた. The N-terminal part of the smooth rib MLCK is an important part of the side control. Beef smooth tendon ではアクチン combined with ドメインに続き, プロテアーゼで cut られeasy い part がありそこで cut られてできる130kDa ingredient は, MLCK activity は preservation されているが, アクチンとのbinding energy は われている. One side of the sand wormwood decomposition enzyme で cut ら れ る part が が し て い る ために,一つのbridgeLCKのみしかgetれらなかったと解釈できる.

项目成果

Kobayashi,H.: "Isolation of cDNA for Bovine Stiomach 155kDa Protein Exhibiting Myosin Light chain Kinase activity" Journal of Biochemistry. 112. 786-792 (1992)

Kobayashi,H.：“展示肌球蛋白轻链激酶活性的牛 Stiomach 155kDa 蛋白的 cDNA 的分离”生物化学杂志。