液胞タンパク質のプロセシングに着目した機能性食品設計法の開発

以液泡蛋白加工为重点的功能性食品设计方法的发展

• 批准号: 04265212
• 负责人: 西村 いくこ
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04265212/
• 关键词: 液胞; プロテインボディ; アレルゲン; 液胞プロセシング酵素; 種子タンパク質; 2Sアルブミン; プロ型前駆体タンパク質; ヒマ胚乳

植物貯蔵タンパク質はいずれも、登熟中の種子細胞の粗面小胞体でプレプロ型前駆体として合成され、シグナルペプチドの切断によってプロ型前駆体となり、液胞に輸送された後に成熟型タンパク質に変換されることを明かにしてきた。植物由来のアレルゲンの一つとして報告されているヒマ種子の2Sタンパク質と類似性のあるタンパク質は高等植物の種子に広く分布している。このタンパク質の登熟種子細胞中での生合成を調べた結果。主要な貯蔵タンパク質との同様の過程を経て合成され、液胞に蓄積されることが解った。即ち、登熟期の種子ではこのような生体にとって有害となるタンパク質も貯蔵タンパク質と同様の経路で合成輸送され、液胞に蓄積されるのである。液胞に輸送されてくる前駆体タンパク質のプロセシングに関与する酵素(液胞プロセシング酵素)をヒマ種子より単離精製することに成功し、これを用いてこの酵素の基質特異性を調べたところ、本酵素が貯蔵タンパク質のみならず、2Sタンパク質をはじめとする他の種子タンパク質の前駆体をもプロセスして成熟型に変換することが解った。また本酵素は基質タンパク質分子の表面に露出しているアスパラギン残基を認識して、そのC末端側を切断することが明かとなった。液胞内プロセシングの機構をさらに詳しく調べるために、精製酵素を抗原としてウサギで抗体せ作製した。この抗体を用いたイムノデロティングおよび合成ペプチドを用いたプロセシング活性の測定から液胞プロセシング酵素の植物界での分布を調べた結果、登熟後期の種子この酵素が最も多く存在するが、種子以多の緑葉などにはほとんど検出できなかった。本酵素のcDNAを単離するために本酵素の登熟ヒマ種子胚乳より調製したpoly(A)_+RNAを基にcDNAライブラリーを作製した。スクリーニングに用いるプローブ作製のため、本酵素の一部のアミノ酸配列を決定することを試みた。本酵素はN末端がブロックされているので、BrCN切断にによって生じたpeptideのアミノ酸配列を決定した。この配列を基にしてオリゴDNAを合成し、これによるスクリーニングと液胞プロセシング酵素に対する特異抗体を用いてのスクリーニングを試みている。

Plant storage 蔵タンパク性はいずれも、Dengzhongのseed cell のrough surface small cell body でプレプロ type front cylindrical body としてsynthetic され、シグナルペプチCut-off type front body and liquid cell transport system The mature type of タンパク性に変changes to されることを明かにしてきた. Origin of Plants のアレルゲンの一つとして Report されているヒマの2Sタンパク性とsimilarityのあるタンパク性は Higher plants' seeds and に広くdistributionしている. The result of the synthesis of このタンパクquality in mature seed cells. Mainly, the storage and storage of the material, the synthesis of the liquid cells, and the solution of the liquid cells. That is, the seeds in the ripening stage are not harmful to the body and are not harmful to the body. The quality of the stored 蔵タンパク is the same as the synthetic transport of the same 様の経路, and the storage of the liquid cells is the same. The liquid cell is transported by the liquid cell and the enzyme (liquid cell enzyme)シングzyme) をヒマseed よりisolation refined することに successfully し, これを uses いてこのzyme matrix Specific をadjusted べたところ, this enzyme タンパク性のみならず, 2S タンパクquality をはじめとするhis seed タンパク性の前槆体をもプロセスして mature type に変change することがsolved った. The surface of this enzyme is exposed on the surface of the base material molecule. The ン residue is recognized and the そのC-terminal side is cut and the することが明かとなった. Intracellular プロセシングのMechanism をさらに detail しく Adjustment べるために, purified enzyme をantigen としてウサギでantibodies せした. Antibodies are used in the synthesis of いたイムノデロティングおよびペプチドをMeasurement of activity of いたプロセシングから Liquid cell enzyme のPlant kingdomでのdistribution を Adjustment べ た results, late ripening seeds こ の enzyme が も く す る が, seeds の green leaves な ど に は と ん 検 検 で き な か っ た. The cDNA of this enzyme is separated from the original enzyme. This enzyme is prepared by the endosperm of mature seeds and is prepared by poly(A)_+RNA based cDNA. The スクリーニングに is made with いるプローブ, and the enzyme のアミノacid formula is decided by the することを trial みた. The N-terminal cleavage of this enzyme and the BrCN-cut peptide are determined by their acid alignment.これによるスクリーニングと liquid cellプロセシングzyme に対する-specific antibody を Use いてのスクリーニングを to try みている.

项目成果

西村 いくこ: "液胞タンパク質の輸送小胞と液胞内におけるプロセシング" バイオサイエンスとインダストリー. 50. 35-38 (1992)

Ikuko Nishimura：“液泡蛋白的运输囊泡和液泡内的加工”《生物科学与工业》50. 35-38 (1992)。