液胞型ATP分解酵素の細胞機能

液泡 ATP 降解酶的细胞功能

• 批准号: 04266103
• 负责人: 吉田 賢右
• 金额: $ 110.02万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04266103/
• 关键词: 液胞型ATPase; 液胞; プロテインスプライシング; 貧食; Na^+輸送; 好塩菌; 好熱菌; 液胞型ATPaseのオペロン; 液胞型ATP分解酵素; H^+輸送; イオンポンプ; 胃酸分泌酵素; バフィロマイシン; 古細菌; V-ATPase; 液胞膜

1.酵母の酸性化コンパートメントの形態構築に関わるVAM4,VAM2,VAM6の3遺伝子の構造を明らかにした.VAM4遺伝子の機能改変の結果,GTP-GDPサイクルがVAM4の機能に重要であることを示した.さらに,酵母の液胞形成に必須なVam3Pのシロイヌナズナ相同遺伝子を同定,単離した.2.V-ATPaseの選択的阻害剤Folimycinは,小胞体からは出ていくがゴルジ器官シス槽での糖鎖プロセシングを受ける以前の過程で糖蛋白質の細胞内転送を阻害すること,また,本阻害剤はV0ドメインに結合することによって阻害作用を示すことを明らかにした.更に,既知のV-ATPase阻害剤と異なって非常に可逆性に富むDestruxin Bの新規な阻害作用を見い出した.V-ATPaseの細胞機能を解析するうえで大変有用となる発見である.3.V-ATPaseによる貧食胞の酸性化が,網膜色素上皮細胞による視細胞外節の分解に必須であることがV-ATPase阻害剤を用いて示された.4.マウス液胞型ATPaseプロテオリピッドの遺伝子をクローン化しエクソン/イントロン構造を明らかにした.またあわせて2つの偽遺伝子の構造が決定された.これらの結果をもとにターゲッティングベクターを作成し,ES細胞に導入した.トランスフォーメーションにより,リソソーム内pHの上昇が誘起されることを見い出した.これらの一連の研究結果により,細胞内酸性化コンパートメントの形成においても,神経細胞から酵母に至るまでの多様な細胞で小胞輸送に関与している細胞構築に関わる分子装置のサブセットが機能していることが示された.5.連鎖球菌Na^+輸送性V-ATPaseがNa^+のuniportを行う酵素であること,16kDaプロテオリピッド(NtpK)に存在するDCCD結合性Glu-139がNa^+の認識に重要な役割を果たすことを明らかにした.本酵素オペロンの発現系を構築した.6.好塩性古細菌のV-ATPaseの分子量30KDa(γ),20KDa(δ),12KDa(ε)の3種類のポリペプチドが単離された.新たに見い出したatpF遺伝子は連鎖球菌のNa^+-ATPaseのntp Cと21.2%の相同性を示した.

1. The structure of three genes of VAM4,VAM2 and VAM6 is related to the morphological structure of the acidic yeast. As a result of the functional modification of VAM 4 gene, the function of VAM4 is important to the GTP-GDP structure. 2. Folimycin, a selective inhibitor of V-ATPase, inhibits the intracellular transport of glycoproteins during the process of cell transformation. The resistance of this material is not limited to V0 and V1. Furthermore, it is known that the V-ATPase inhibitor is highly reversible, and the new inhibitor of Destruxin B is highly effective.3. The V-ATPase inhibitor is acidic. 4. The structure of V-ATPase inhibitor in retinal pigment epithelial cells is very important for the decomposition of the outer segment of optic cells. The structure of the pseudogene is determined by two factors. The result is that ES cells are introduced into the system. The pH of the solution rises due to the increase of pH in the solution, and the pH of the solution rises due to the increase of pH in the solution. The results of this series of studies show that intracellular acidification is related to cellular transport from yeast to multiple cellular vesicles, and cellular architecture is related to the function of molecular devices. 5. Chain coccus Na^+-transporting V-ATPase Na^+-uniport enzyme. 16kDa protein binding to Glu-139 in the presence of DCCD is important for understanding the effects of Na^+. 6. Three species of V-ATPase with molecular weights of 30KDa(γ),20KDa(δ), and 12KDa(ε) were isolated from each other. The identity of 21.2% of the Na^+-ATPase ntp C of the new strain was shown.

项目成果

Y.Anraku: "Geneticand cell biological aspects of the yeast vacuolar H^+-ATPase." J.Bioenerg.Biomembr.24. 395-405 (1992)

Y.Anraku：“酵母液泡 H+-ATP 酶的遗传学和细胞生物学方面。”

Wada,Y.: "Chemiosmotic Coupling of lon Transport in the Yeast Vacuole:its role in acidification inside organelles." J.Bioenerg.Biomemb.26. 631-637 (1994)

Wada,Y.：“酵母液泡中离子传输的化学渗透耦合：其在细胞器内酸化中的作用。”

Henomatsu,N.: "Inhibition of intracellular transport of newly synthesized prolactin by bafilomycin A_1 in a pituitary tumor cell line,CH_3 cells" Eur.J.Cell Biol.62. 127-139 (1993)

Henomatsu,N.：“巴弗洛霉素 A_1 在垂体肿瘤细胞系 CH_3 细胞中抑制新合成催乳素的细胞内转运”Eur.J.Cell Biol.62。

K.Ihara: "Halobacterial A-ATP synthase in relation to V-ATPase" J.exp.Biol.172. 475-485 (1992)

K.Ihara：“与 V-ATP 酶相关的盐细菌 A-ATP 合酶”J.exp.Biol.172。

Hirata,R.: "VMA12 is Essential for Assembly of the Vacuolar H^+-ATPase Subunits onto the Vacuolar Membrane in Saccharomyces cerevisiae" J.Biol.Chem.268. 961-967 (1993)

Hirata,R.：“VMA12 对于将液泡 H+ -ATP 酶亚基组装到酿酒酵母液泡膜上至关重要”J.Biol.Chem.268。