アルツハイマー病皮膚線維芽細胞におけるAPP遺伝子発現の解析と早期診断への応用

阿尔茨海默病皮肤成纤维细胞APP基因表达分析及其早期诊断应用

• 批准号: 04268210
• 负责人: 高橋 和郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04268210/
• 关键词: Amyloid precursov pvotein; Dementia of the Algheimes Type; Skin fibroblast

アルツハイマー型痴呆(DAT)脳におけるアミロイド形成には、アミロイドB蛋白前駆体(APP)の異常、特にプロテアーゼ阻害領域が挿入されたアミロイドB蛋白前駆体(APPI)の関与が示唆されている。Selkoeらのグループよる1989年に、脳以外の組織(皮膚、小腸、ほか)ほのB蛋白の沈着が報告され、DATは全身性痴患として考えられてきている。そこで我々は、DAT患者皮膚線維芽細胞を用いてAPPI異常をmRNAレベルで検討した。[対象及び方法]DAT12例、脳血管性痴呆(MID)4例、対照群(非痴呆性神経疾患)7例を対象とした。皮膚線維芽細胞は患者本人及び家族の同意を得た後、上腕皮膚より採取し培養した。RNA抽出は、グアニジンチオシアン酸法で行った。次に、Goldeらの方法に従って、まず逆転写酵素で処理した後、Polymerase chain reaction(PCR)法で増幅した。APP遺伝子のexon 6とexon 9の塩基配列をもとに2種のプライマーを作成し、一方の32Pで標識した。PCRの後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、オートラジオグラフィーを行い、APP695,APP751,APP770の各分画をdensitometerで測定し、相対発現比を3群間で検討した。[結果]APP695に対するAPP751,APP770mRNAの発現比(APP751/APP695,APP770/APP695)は、共にDAT群でMID群や対照群と比較して有意に増加しいた。[今後の予定]今回の検討で、皮膚線維芽細胞におけるAPPI mRNAの増加はDAT剖検脳での結果とよく一致することを確認し、また皮膚へのB蛋白の沈着は局所産生説を支持するもとの考えられた。今後は、(1)他の痴呆をきたする疾患を対象に加え、DATの診断マーカーとなり得るか?(2)ダウン症侯群を対象とし、APP遺伝子のスプライシング異常がいつの時期より出現するものか?の問題点を検討する予定である。

ア ル ツ ハ イ マ ー dementia (DAT) 脳 に お け る ア ミ ロ イ ド form に は, ア ミ ロ イ ド 駆 body before B protein (APP) の anomaly, に プ ロ テ ア ー ゼ resistance against field が scions into さ れ た ア ミ ロ イ ド 駆 body before B protein (APPI) の masato and が in stopping さ れ て い る. Selkoe ら の グ ル ー プ よ る に 1989, 脳 の tissue (skin, small intestine, ほ か) ほ の B protein の shen the が report さ れ, DAT は systemic delusion of と し て exam え ら れ て き て い る. そ こ で I 々 は, DAT patients skin line d を bud cells with い て APPI abnormal を mRNA レ ベ ル で beg し 検 た. [Comparison and び methods]DAT12 cases, 脳 vascular dementia (MID)4 cases, comparison group (non-dementia neurological disorders)7 cases を comparison と と た. After the patient and his/her び family <s:1> agreed to を for た, the skin of the upper wrist よ を was used for the culture of <s:1> た. RNA extraction is carried out by <s:1>, グアニジ, チ, シア, シア acid method で for った. に, Golde ら の way に 従 っ て, ま ず inverse planning write enzyme で 処 Richard し た, Polymerase chain reaction (PCR) method of で raised し た. APP heritage 伝 son の exon 6 と exon 9 の salt base with column を も と に two の プ ラ イ マ ー を make し, one party の 32 p で logo し た. , after PCR の ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル 気 swimming, オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ ー を い, APP695, APP751, APP770 の each painting を densitometer で determination し, phase between 発 now than を 3 group of seaborne で beg し 検 た. [results] APP695 に す seaborne る APP751, APP770mRNA の 発 now than (APP751 / APP695, APP770 / APP695) は, に DAT group で や MID group according to the group of seaborne と compare し て intentionally に raised し requirement by い た. [future の designated] today back の beg で 検 d bud cells, skin line に お け る APPI mRNA の raised plus は DAT cutting 検 脳 で の results と よ く consistent す る こ と を confirm し, ま た skin へ の B protein の shen the は bureau said produce を support す る も と の exam え ら れ た. In the future, を, (1) he has <s:1> dementia を を たする たする disease を, に plus え, DAT <s:1> diagnosis, を カ カ とな とな とな とな とな とな る たする? (2) ダ ウ ン disease Hou Qun を like と seaborne し, APP but 伝 の ス プ ラ イ シ ン グ abnormal が い つ の period よ り appear す る も の か? The problem point を検 asks for する to determine である.

项目成果

Urakame K: "Clinical courses and CSF amyloid B protein precursor hauing site of application of the protease inhibitor levels in patieuts with ementia of the Alzheimer thpe." Dementia. 4. 59-60 (1993)

Urakame K：“在患有阿尔茨海默病的痴呆患者中，蛋白酶抑制剂水平的临床过程和脑脊液淀粉样蛋白 B 蛋白前体的应用部位。”

岡田 昭嗣: "アルツハイマー型痴呆患者の皮膚線維芽細胞でAPP751,APP770mRNAの発現比が増加している。" 神経内科. 37. 103-104 (1992)

Akitsugu Okada：“阿尔茨海默氏痴呆患者的皮肤成纤维细胞中 APP751 和 APP770 mRNA 的表达比例增加。” 神经病学 37. 103-104 (1992)

Urakame K: "Amyloid B Portein precursors with Kunitz-tgpe inhibitors domains and acetylcholimesterase in cerbrospinal fluid from patients with clomentia of the Alzheimer type." Acta Neurol Scond. 85. 343-346 (1992)

Urakame K：“阿尔茨海默氏症患者的脑脊液中含有 Kunitz-tgpe 抑制剂结构域和乙酰胆碱酯酶的淀粉样蛋白 B 蛋白前体。”