HIVに対するヒト型モノクローナル抗体の作製とその生物学的性質の解析

1.エイズの病原ウイルスであるHIV(human immunodeficiecy virus)の関連蛋白であるEnv蛋白、Gag蛋白、Pol蛋白、などに対するヒト型モノクローナル抗体を作製することを試みた。今までに種々の方法を試みたが、その中でわれわれにとって最も効率的な方法と、それによって得られた結果について以下に報告する。2.久留米大学病院にて第1内科名取英世講師が治療および経過観察している4名のHIV抗体陽性者より、定期的に末梢血を提出してもらい、それらから単核球せ分離した。その単核球にEB Virusを感染させ、Cyclosporian Aの存在下で7日間培養させた。その後96穴のマイクロプレートに細胞を移しfeeder細胞と共に培養を続けた。feeder細胞としては、5,000rad照射したヒトの末梢血単核球を用いた。培養開始後、3-4週間でtransformしたB細胞の増殖が認められたが、その培養華清中の抗体活性については、HIVのlysate(Scripps Lab)、recombinant Gag蛋白、およびrecombinant Pol蛋白を抗原として用いたELISA法によって検討した。3.その結果、陽性のB細胞集団が20種類以上得られた。しかし、これらの培養上清は上記の3種類の抗原の全てと反応した。このことは、この段階で得られたB細胞集団がまだクローン化はされておらず、複数の抗体産生細胞クローンの集合体であることを示している。現在、これらのB細胞集団からクローンを取る作業を行っている。4.今後、クローンが取れた段階で、それらのB細胞が産生分泌する抗体の認識するHIV関連蛋白を、ELISA法やWestern blot法で同定する。また、それらの抗体の生物学的活性を検討する。さらに、抗体の産生分泌を安定させるためにヒト-ヒトhybridomaを作製する。

1.エイズの病原ウイルスであるHIV(human immunodeficiecy virus)の関連蛋白であるEnv蛋白、Gag蛋白、Pol蛋白、などに対するヒト型モノクローナル抗体を作製することを試みた。今までに種々の方法を試みたが、その中でわれわれにとって最も効率的な方法と、それによって得られた結果について以下に報告する。2.久留米大学病院にて第1内科名取英世講師が治療および経過観察している4名のHIV抗体陽性者より、定期的に末梢血を提出してもらい、それらから単核球せ分離した。その単核球にEB Virusを感染させ、Cyclosporian Aの存在下で7日間培養させた。その後96穴のマイクロプレートに細胞を移しfeeder細胞と共に培養を続けた。feeder細胞としては、5,000rad照射したヒトの末梢血単核球を用いた。培養開始後、3-4週間でtransformしたB細胞の増殖が認められたが、その培養華清中の抗体活性については、HIVのlysate(Scripps Lab)、recombinant Gag蛋白、およびrecombinant Pol蛋白を抗原として用いたELISA法によって検討した。3.その結果、陽性のB細胞集団が20種類以上得られた。しかし、これらの培養上清は上記の3種類の抗原の全てと反応した。このことは、この段階で得られたB細胞集団がまだクローン化はされておらず、複数の抗体産生細胞クローンの集合体であることを示している。現在、これらのB細胞集団からクローンを取る作業を行っている。4.今後、クローンが取れた段階で、それらのB細胞が産生分泌する抗体の認識するHIV関連蛋白を、ELISA法やWestern blot法で同定する。また、それらの抗体の生物学的活性を検討する。さらに、抗体の産生分泌を安定させるためにヒト-ヒトhybridomaを作製する。