HIVに対するヒト型モノクローナル抗体の作製とその生物学的性質の解析

抗HIV人单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

• 批准号: 04269213
• 负责人: 佐川 公矯
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04269213/
• 关键词: エイズ; HIV; モノクローナル抗体; ヒト型モノクローナル抗体; 中和抗体

1.エイズの病原ウイルスであるHIV(human immunodeficiecy virus)の関連蛋白であるEnv蛋白、Gag蛋白、Pol蛋白、などに対するヒト型モノクローナル抗体を作製することを試みた。今までに種々の方法を試みたが、その中でわれわれにとって最も効率的な方法と、それによって得られた結果について以下に報告する。2.久留米大学病院にて第1内科名取英世講師が治療および経過観察している4名のHIV抗体陽性者より、定期的に末梢血を提出してもらい、それらから単核球せ分離した。その単核球にEB Virusを感染させ、Cyclosporian Aの存在下で7日間培養させた。その後96穴のマイクロプレートに細胞を移しfeeder細胞と共に培養を続けた。feeder細胞としては、5,000rad照射したヒトの末梢血単核球を用いた。培養開始後、3-4週間でtransformしたB細胞の増殖が認められたが、その培養華清中の抗体活性については、HIVのlysate(Scripps Lab)、recombinant Gag蛋白、およびrecombinant Pol蛋白を抗原として用いたELISA法によって検討した。3.その結果、陽性のB細胞集団が20種類以上得られた。しかし、これらの培養上清は上記の3種類の抗原の全てと反応した。このことは、この段階で得られたB細胞集団がまだクローン化はされておらず、複数の抗体産生細胞クローンの集合体であることを示している。現在、これらのB細胞集団からクローンを取る作業を行っている。4.今後、クローンが取れた段階で、それらのB細胞が産生分泌する抗体の認識するHIV関連蛋白を、ELISA法やWestern blot法で同定する。また、それらの抗体の生物学的活性を検討する。さらに、抗体の産生分泌を安定させるためにヒト-ヒトhybridomaを作製する。

1. Human immunodeficiency virus (human immunodeficiency virus) Virus) related protein, Env protein, Gag protein, Pol protein, and などに対するヒト-type モノクローナルantibodies することをtestみた. The method of using this method is the most effective. The rate of the method is the same, and the results are as follows. 2. Kurume University Hospital, No. 1 Department of Internal Medicine, Lecturer, Hideyo Natori, No. 4 of the Department of Internal Medicine For those who are positive for IV antibodies, regular peripheral blood tests will be carried out and the nuclei will be separated. Infection with EB Virus and Cyclosporian A infection were carried out in 7 days of culture in the presence of Cyclosporian A. The 96-hole のマイクロプレートに cells are transferred and the feeder cells are cultured together. Feeder cells are used, and 5,000rad irradiation is used for peripheral blood mononuclear spheres. After the start of culture, 3-4 weeks after the start of culture, でtransform したB cell のproliferation がidentification められたが, そのculture Huaqingchu のantibody activity については, HIV lysate (Scripps Lab), recombinant Gag protein, およびrecombinant The Pol protein antigen was analyzed using an ELISA method. 3. If the results are positive and there are more than 20 types of positive B cells, it will be obtained. The three types of antigens recorded in the culture supernatant of しかし and これらの are all てとantigens. B cell collection collectionおらず, plural のantibody-producing cell クローンのassemble であることを Show している. Now, the B-cell collection is done now. 4. From now on, we will use the same methods to identify HIV-related proteins and ELISA methods as well as the Western blot method to identify the production and secretion of antibodies by B cells.また、それらのThe biological activity of the antibody is the same.さらに、antibody production and secretion をstabilization させるためにヒト-ヒトhybridomaをproductionする.

项目成果

Masahiro Inoue: "Down-regulation of CD4 molecules by the expression of Nef;Quantitative analysis of CD4 antigens on the cell surfaces" International Immunology.

Masahiro Inoue：“Nef 表达下调 CD4 分子；细胞表面 CD4 抗原的定量分析”《国际免疫学》。