HIVの生物活性を抑制するヒト型モノクローナル抗体の作製とその大量生産

抑制艾滋病毒生物活性的人类单克隆抗体的创建和大规模生产

• 批准号: 06255217
• 负责人: 佐川 公矯
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06255217/
• 关键词: HIV; AIDS; モノクローナル抗体; ヒト型モノクローナル抗体

1.Human Immunodeficiency virus(HIV)のEnv蛋白,Pol蛋白,Gag蛋白などに対するヒト型モノクローナル抗体を作製し,その中からHIVの生物活性を抑制する抗体を選別することを試みた.2.まず,われわれが久留米大学附属病院において定期的に診察している4名のHIV感染者の末梢血からリンパ球を分離し,Epstain-Barr virus(EBV)を感染させ,サイクロスポリンAの存在下で24穴の培養プレートの中で培養を開始した.3.EBVの感染により不死化して増殖してきたBリンパ球を,限界希釈法によってクローニングした.なお,クローニングのためのfeeder cellsとして,ドナー本人のEBV不死化Bリンパ球で,HIVに対して抗体を産生していない細胞を,放射線照射して使用した,クローン化Bリンパ球の培養上清について,HIVに対する抗体活性を検討した,まず,第1次スクリーニングとして,HIVのlysate(Scripps Lab.より入手)を抗原としたELISA法を実施した.続いて第2次スクリーニングとして,リコンビナントのHIVのEnv蛋白,Pol蛋白,Gag蛋白などを抗原としたELISA法で検討した.その結果,陽性のクローンが30種類以上得られた.しかしこれらのクローンの培養上清は上記のすべての抗原と反応した.この結果は,得られたクローンがまだ複数のクローンの集合体であることを意味している.現在,再クローニングを行なっている.また,上記の抗体を産生しているBリンパ球とSHM-D3細胞(mouse-human hetero-myeloma cells)を細胞融合させ,ハイブリドーマを作製する作業も行なっている.4.抗体の生物活性に関しては,HIVのreverse transcriptaseの産生を抑制するか,HIVによる巨細胞形成を抑制するか,HIVによる細胞死を抑制するか,などを指標として調べている.

1. Human Immunodeficiency Virus(HIV) Env protein,Pol protein,Gag protein, etc. Type of antibody production, selection of antibodies that inhibit HIV biological activity, etc. 2. During regular examination at Kurumi University Hospital, four HIV-infected individuals were isolated from peripheral blood and infected with Epstain-Barr virus(EBV). In the presence of EBV A, the culture of 24 holes was started. 3. EBV infection was not killed. In addition, the feeder cells of EBV inactivated virus B cells were irradiated with radiation, and the antibody activity against HIV was evaluated. In addition, the ELISA method was used for the first time. HIV Env protein,Pol protein,Gag protein, antigen, ELISA method. The results showed that more than 30 kinds of positive cases were found. The culture supernatant of the sample was purified and the antigen was detected. As a result, we can get a lot of information about the aggregation of the information. Now, let's go back to the old days. 4. Biological activity of antibodies is related to inhibition of HIV reverse transcriptase production, HIV giant cell formation, HIV cell death inhibition, and modulation.