HIVの生物を抑制するヒト型モノクローナル抗体の作製とその大量生産

点击翻译按钮获取中文摘要

1.エイズの病原ウイルスであるHIV(human immunodeficiency virus)のEnv蛋白、Pol蛋白Gag蛋白、Nef蛋白、などに対するヒト型(ヒトのimmunoglobulin)モノクローナル抗体の作製を試みた。将来、HIV感染の予防、HIV感染者のよ治療、さらにワクチンの関発などの研究試薬として、ヒト型のモノクローナル抗体を大量に作製するためである。2.われわれが定期的に診察しているHIV感染者5名の末梢血からリンパ球を分離しEpstain-Barr virus(EBV)を感染させ、培養を開始した。3.EBVの感染で不死化して増殖してきたBリンパ球を、限界希釈法によってクローニングし、クローン化したBリンパ球の培養上清について、HIVに対する抗体活性を検査した。まず、抗体の第1次スクリーニングとしてHIVのlysate((Scripps Instituteより購入)を抗原としたELISA法を実施した。続いて、第2次スクリーニングとして、リコンビナントのHIVのEnv蛋白、Pol蛋白、Gag蛋白、Nef蛋白などを抗原としたELISA法で、抗体活性を検討した。なお、クローニングのfeeder cellsとして、ドナー本人のEBV不死化Bリンパ球でHIVに対して抗体を産生していない細胞を放射線処理して使用した。4.その結果、陽性のクローンが20種類以上得られた。しかし、これらのクローンの培養上清は上記の4種類の抗原のすべてと反応した。このことはこれらのクローンがまだ複数の抗体産生細胞クローンの集合体であることを示している。現在、再クローニングを行っている。また同時に、ヒト型モノクローナル抗体を産生する細胞をSHM-D3(mouse-humanhetero-myeloma cells)と細胞融合させ、ハイを作製する作業も行っている。5.また、第3次スクリーニングとして、培養上清の抗体活性を、HIVのreverse transcriptaseの産生を抑制するか、HIVによる巨細胞形成を抑制するか、HIVによる細胞死を抑制するか、などを指標として調べている。