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自食作用に関与する遺伝子群の分子生物学的解析

自噬相关基因的分子生物学分析

基本信息

批准号：
05252209
负责人：
大隅良典
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05252209/
关键词：
自食作用 APG変異タンパクキナーゼ酵母栄養飢餓

项目摘要

近年我々は酵母細胞が種々の栄養飢餓条件下に高等動物細胞で知られると同様な自食作用を誘導することを見いだした。すなわち細胞を種々の栄養飢餓にさらすと1時間後に液胞内に細胞質を内容物とする-重膜構造-自食体が形成される。この形態学的な特徴に基づき自食作用に欠損をもつ変異株を系統的に取得した。それらの遺伝解析の結果、この過程に少なくとも15個のAPG遺伝子が関与することを明らかにした。これは複雑で高度に制御されている自食作用の研究に初めて遺伝学的手法を導入したものである。これらAPG遺伝子の構造と機能の解析を通じて自食作用の膜動態を分子レベルで理解することを目的とした。最初に得られたAPGI遺伝子のクローニング、塩基配列の決定、遺伝子破壊、遺伝子の改変、遺伝子産物の同定を行った。その結果APGI遺伝子は897個のアミノ酸からなるタンパク質キナーゼをコードすることが明らかとなった。現在自食作用の誘導に必須の本酵素の詳細な解析を進めている。さらに他の多数のAPG変異もクローニング、構造解析が進行中であり、これらの相互関係の解析が進みつつある。pg変異は電子顕微鏡観察の結果、極立った膜構造の蓄積をもつものはみとめられなかった。しかし液胞欠損株二重変異株はオートファゴソームを蓄積することが明らかとなり今後の生化学的解析の手掛りが得られた。

In recent years, yeast cells have been cultured under starvation conditions and self-feeding has been induced. After 1 hour of incubation, the cytoplasm contents of the cytoplasm in the cytoplasm of the cell are formed into a heavy membrane structure and autophagy is formed. The morphological characteristics of these plants are based on the characteristics of self-eclipse, and the characteristics of these plants are based on the characteristics of self-eclipse. There are at least 15 APG vectors associated with the result of the analysis and the process. The study of self-absorption effect of the compound enzyme was carried out at the beginning of the study. The structure and function of APG molecules are analyzed through self-absorption and molecular dynamics. Initially, APGI gene discovery, gene alignment determination, gene discovery, gene modification, and gene product identification were obtained. The results of APGI show that there are 897 cases in which the quality of the product is different. Now, the enzyme must be analyzed in detail for autophagy induction. For most of them, the structural analysis is in progress, and the analysis of the relationship between them is in progress. The results of electron microscope observation and accumulation of polar film structure are as follows: The results of biochemical analysis showed that the growth rate of the mutant was higher than that of the control group.