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液胞内タンパク分解の定量化とその生理的役割の解析

液泡内蛋白水解的定量及其生理作用分析

基本信息

批准号：
05640725
负责人：
大隅良典
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05640725/
关键词：
自食作用液胞タンパク質分解 apg変異 H^+-ATPase 酵母

项目摘要

細胞活動は絶えず合成と分解が動的な平衡関係によって維持されている。タンパク質の細胞内分解経路としてはユビキチン経路とリソソーム(液胞)経路とが知られている。最近我々は酵母の液胞に於ける分解が高等動物の自食作用と同様な機構によることを明らかにして来た。本研究は液胞内での分解-自食作用がいかなる機構によって誘導されるか、また液胞内の分解はいかなる生理的役割を担っているかについて、タンパク質分解を定量化することを通じて明らかにすることを目的とした。本年度の研究によって得られた主な成果は以下の通りである。(1)自食作用不能株(apg1-15)、タンパク分解酵素欠損株、液胞欠損株などを用いて、放射性アミノ酸標識細胞のタンパク分解における自食作用の寄与を明らかにした。(2)PMSFを用いることにより野生型酵母の液胞内タンパク質分解を定量化し、栄養飢餓下に誘導されるタンパク質分解が細胞の生存率の維持に必須の役割をもつことを示した。(3)自食体の液胞内分解に欠損をもつ変異株を系統的に分離し、4つの変異abd1-4を同定した。abd1,2,3はそれぞれ液胞膜H^+-ATPaseの構成サブユニットをコードするVAM遺伝子の変異であった。自食体の分解にはH^+-ATPaseが必須である。

The balance of cellular activity between synthesis and decomposition is maintained. The intracellular decomposition pathway of the cytoplasm is transformed into the intracellular decomposition pathway. Recently, the yeast cell decomposition and higher animal self-feeding and the same mechanism have been developed. In this study, the mechanism of decomposition and autophagy in the cell was induced, and the physiological mechanism of decomposition and autophagy was quantified. This year's research has been successful. (1)Autophagous cells (apg1-15), breakdown enzymes deficient cells, cytosis deficient cells, radioactive acid labeled cells, breakdown enzymes, and autophagous cells were identified. (2)PMSF was used to quantify intracellular cytokinesis in wild-type yeast, and to induce cytokinesis in cultured and starved yeast, and to maintain cell viability. (3)In the case of cellular decomposition of autophagous organisms, there is a lack of separation of different plants and systems, and 4 different abd1-4 is the same. abd1,2,3 are different from each other in the composition of VAM gene. H^+-ATPase is essential for autophagy.