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Saccharomyces酵母を用いたペルオキシソームタンパク選別輸送の解析

使用酵母菌分析过氧化物酶体蛋白质分选运输

基本信息

批准号：
05252217
负责人：
田中渥夫
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ペルオキシソームへのタンパク輸送局在化シグナルとして、タンパクのC末の-SKL様配列が重要であることが証明されてきているが、必ずしも同配列を持たないものも多く見つかっている。酵母においても、ペルオキシソームへのタンパク輸送には複数の経路の存在や異なったいくつかの因子の関与が考えられている。我々はすでにペルオキシソームの誘導が難しかったSaccharomyces cerevisiae酵母で誘導条件を見い出すとともに、本酵母でCandida酵母のペルオキシソーム局在酵素をコードする遺伝子を高発現させ、また、本酵母内に発達させたペルオキシソーム内にこの高発現したCandida酵母のペルオキシソーム酵素タンパクを取り込ませる系の作成に成功している。本年度は上記の系を用いて、次のような成果を得た。すなわち、S.cerevisiaeを用いて完全長のイソクエン酸リアーゼ(ICL)とC末AKV欠失改変ICL、ならびに対照としてβ-ガラクトシダーゼを発現させてペルオキシソームへの選別輸送実験を行ったところ、前2者のみがペルオキシソームを選別認識したが、完全長ICLが内部に輸送されるのに対し、改変ICLはほとんど膜の外側に留まり、しかも分解されて断片化していることがわかった。また、両者はNative-PAGEでも異なった挙動を示し、膜透過においてタンパクのC末の立体構造の寄与が必須であり、選別認識にはC末以外の部分も必要であることが示唆された。一方、S.cerevisiaeのペルオキシソーム膜からPAS10ならびにPAS3の遺伝子産物と思われる67および50kDaの膜タンパクを同定した。これらタンパクの輸送マシナリーへの関与も今後、上述の系を用いて追及できるものと考えている。

ペルオキシソームへのタンパクTransportation Bureau is in the chemical シグナルとして, タンパクのClastの-SKL様arrangement It is important to prove that the であることがproves されてきているが. Plural form of yeast The existence of the road is different and the factors are different and the factors are different. I'm a saccharomyces cerevisiae yeast でinducing conditions を见い出すとともに、this yeast でCand ida yeast のペルオキシソームbureau in enzyme をコードする伝子を高発成させ、また, this yeast has a high growth potential Yeast のペルオキシソーム enzyme タンパクをtake the り込ませるsystemの成に成している. This year, the results of the above-mentioned system and the results of the second time are obtained.すなわち, S.cerevisiae を Use いて Completely long のイソクエン acid リアーゼ(ICL) とC end AKV lack ICL, ならびに対毾恨してβ-ガラクトシダーゼを発existing させてペルオキシソームへの Selection and transportation験を行ったところ, the first 2 of them are のみがペルオキシソームをselect recognition したが, and the full-length ICL が internal にtransport されるのに対し, change the ICL はほとんど film の outside にstay まり, しかも decomposition されて fragmentation していることがわかった.また、両者はNative-PAGEでもdifferentなった挙动をshowし、Membrane penetration においてタンパクのCEnd It is necessary to know the three-dimensional structure and the parts other than the end of C. One side, S.cerevisiae のペルオキシソーム film からPAS10ならびにPAS3's legacy sub-product, と思われる67および50kDa のmembrane タンパクを同定した.これらタンパクの Transport マシナリーへの关 and もFrom now on, the above-mentioned の system を will be chased with できるものと卡えている.