活性ゾーソの有無に注目した逆行性伝達物質検定のための神経培養系の開発

开发用于逆行递质测定的神经元培养系统，重点关注活性 zoso 的存在或不存在

• 批准号: 05260223
• 负责人: 山口 和彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05260223/
• 关键词: 脊髄後根神経節細胞; 共培養; ホールセル・パッチクランプ法; 興奮性シナプス電流; アラキドン酸; Naナイトロプルッシド; シナプスファイシン; 活性ゾーン

本研究においては培養神経細胞を用いて神経突起末端部からの伝達物質放出に対する逆行性情報伝達物質の影響を、【.encircled1.】活性ゾーンを持つ場合、【.encircled2.】活性ゾーンを持たない場合それぞれについて解析することを目的とした。【.encircled1.】活性ゾーンを持つ場合については、胎生15日のラット胚より脊髄後根神経節(DRG)細胞および脊髄神経細胞を酵素処理により単離した後、共培養してシナプスを作らせた。10-20日間培養後、DRG細胞からシナプス入力を受けていると思われる大型脊髄神経細胞よりホールセル・パッチクランプ法によって記録すると自発性の興奮性シナプス電流(EPSC)が見られた。事象の大きさは4-40pAに分布していた。単一サイトからの放出という保証はないので詳細な量子解析は行わなかったが、平均頻度33events/sec、大きさの平均値14pAであった。この自発放出に対する逆行性情報伝達物質候補物質の影響を探るため、アラキドン酸(50muM)、Naナイトロプルッシド(100muM)を投与した。しかし、どちらの物質も上記の平均epsc頻度、epscの大きさの平均値に有意差を生じさせなかった。【.encircled2.】については単独培養したDRG細胞の神経突起先端部(活性ゾーンを持たない)からの伝達物質放出について検討した。まず、神経突起が軸索と考えられるかについて検討した。中枢神経細胞において軸索特異的蛋白質であるタウに対する抗体で染めたところすべての神経突起はタウ陽性となり、神経突起は軸索である可能性が強く示唆された。また、神経突起先端部はシナプス顆粒膜特異的蛋白質シナプトファイシンに陽性であり、顆粒の存在が示された。放出及びそれに対する逆行性情報伝達物質の影響についてグルタミン酸受容体膜をはりつけたパッチ電極を用いて現在検討している。

In this study, we investigated the effects of retrograde information on the release of substances from the terminal regions of cultured neurons. Active The activity of the enzyme is determined by the activity of the enzyme.【.encircled1.】Activity of DRG cells in vitro and in vitro is important for the development of DRG cells. 10-20 After day-time culture, DRG cells were exposed to stress and spontaneous excitatory currents (EPSC) were recorded in large spinal neurons. The distribution of events was 4-40pA. The release of in a single server ensures that the detailed quantum analysis will be performed with an average frequency of 33events/sec and an average value of 14pA. The influence of retrograde information on the spontaneous emission of candidate substances was investigated by using acid (50muM) and sodium hydroxide (100muM). The average epsc frequency and the average epsc value of the substance recorded on the screen are intentionally different.【.encircled2.】In addition, DRG cells were cultured independently from the central nervous system, and the active substances were released. The nerve axis and the nerve axis are the same. The axon-specific protein in the central nervous system is highly likely to be present in the axon-specific protein. The presence of a protein specific to the granule membrane in the tip of the neuron is indicated by the presence of a protein specific to the granule membrane. The emission and the retrograde information of the substance are discussed in the present paper.

项目成果

Yamaguchi,K.: "Regulation of neurite-outgrowth by intracellular calium in cultured mammalian neuron" Biomedical Research. 14suppl.2. 161-162 (1993)

Yamaguchi,K.：“培养的哺乳动物神经元中细胞内钙对神经突生长的调节”生物医学研究。

Yamaguchi,K: "Suppressoin of the slow K-current by cholinergic agoniyts in cultured chick cochlear ganglion neurones" Jownal of Physiology. 464. 213-228 (1993)

Yamaguchi,K：“培养鸡耳蜗神经节神经元中胆碱能激动剂对慢 K 电流的抑制”《生理学杂志》。