神経突起末端部における神経細胞膜蛋白質HPC-1の機能に関する生理学的研究

神经突末梢神经元膜蛋白HPC-1功能的生理研究

• 批准号: 06680814
• 负责人: 山口 和彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680814/
• 关键词: HPC-1; シンタキシン; Caチャネル; パッチクランプ法; アンチセンスオリゴヌクレオチド; 脊髄後根神経節; 海馬; 培養神経細胞

本研究は神経特異的膜HPC-1/シンタキシン-1の機能を阻害させたときに、神経細胞の機能にどのような影響が出るか、特に膜に存在するイオンチャネルや各種レセプターの機能にどのような影響がでるかについて調べた。以下当該年度における結果を記す。(1)アンチセンスオリゴヌクレオチドによる阻害実験:比較的太い神経突起末端部を持つ神経節細胞の無血清培養系を成体ラット脊髄後根神経節細胞を用いて開発し、神経突起末端部膜にNaチャネル、Kチャネル、L型Caチャネル、N型Caチャネルが存在することをパッチクランプ法により見いだした。また、fura-2蛍光画像解析法によりN型とL型の先端部における分布パターンが異なる事を見いだした。HPC-1蛋白質の発現を抑える目的でHPC-1 mRNAに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを適用し2日間培養したところ、神経突起の形態が大きく変わり、分岐の多い極めて細いものとなり、パッチクランプ法の適用が困難となったが、HPC-1の新たな機能として細胞骨格系との相互作用により、神経細胞の形態形成にも関与していることが明らかになった。(2)パッチ電極による抗体の細胞内投与実験:シナプス伝達の関与するCaチャネル、グルタミン酸受容体などとHPC-1の関係を調べるためにラット海馬神経細胞の培養系においてホールセルクランプ法によりパッチピペットより抗HPC-1抗体を細胞内に投与し、シナプス伝達物質(グルタミン酸)に及ぼす効果を検討した。HPC-1抗体投与により発生する興奮性シナプス後電位の大きさは増加する傾向がみられた。しかし、素量子応答の大きさは変わらないことから、グルタミン酸受容体の感受性はHPC-1抗体の影響を受けず、また反応潜時も影響を受けない事からCaイオンの細胞内拡散にも影響がなく、シナプス顆粒の融合放出にHPC-1が抑制的に関与している可能性が示唆された。

In this study, the function of HPC-1/SCN-1, the function of neurons, and the function of SCN-1 were investigated. The following is a summary of the results for the year. (1)The results showed that the serum-free culture system of ganglion cells maintained at the terminal part of neurite in comparison with that of adult root ganglion cells developed in use, and Na, K, L and N type Ca were present in the membrane of neurite terminal part. The N-type and L-type tip portions are distributed in different ways. HPC-1 protein expression inhibition purposes: HPC-1 mRNA expression response to changes in the morphology of neuronal processes during daytime culture, changes in the morphology of neuronal processes, changes in the morphology of neuronal processes, The morphogenesis of neurons is related to the development of brain cells. (2)Intracellular administration of antibodies to HPC-1 in culture systems of hippocampal neurons was investigated by the method of intracellular administration of antibodies to HPC-1 and the effects of intracellular administration of antibodies to HPC-1. HPC-1 antibody induced excitatory potential increases after administration. The effect of anti-latent time on the sensitivity of HPC-1 antibody to Ca2 + receptor was studied. The effect of intracellular Ca2 + dispersion on the inhibition of HPC-1 fusion and release of Ca2 + particles was also studied.

项目成果

Yamaguchi,K.: "Exocytosis relating proteins in the nervous system." Neuroscience Research. 20. 289-292 (1994)

Yamaguchi,K.：“神经系统中与胞吐作用相关的蛋白质。”

Yamaguchi,K.: "Physiological and pharmacological properties of the neurite terminal membrane of the cultured rat sensory ganglion neuron." Jpn.J.Physial.44 Suppll. S22 (1994)

Yamaguchi,K.：“培养的大鼠感觉神经节神经元神经突末端膜的生理和药理学特性。”

Yamaguchi,K.: "Enhancement of neurite-sprouting by suppression of HPC-1/syntaxin-1A activity." (発表予定).

Yamaguchi, K.：“通过抑制 HPC-1/syntaxin-1A 活性来增强神经突萌发。”（待提交）。