シナプス前膜蛋白質に対するアンチセンスDNA等を用いた神経伝達物質放出機構の解析

利用突触前膜蛋白反义DNA分析神经递质释放机制

• 批准号: 05680732
• 负责人: 山口 和彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680732/
• 关键词: HPC-1; アンチセンスDNA; 脊髄後根神経節細胞; 単離培養系; 神経突起末端部; ホールセル・クランプ法; シナプトファイシン; 出芽

本研究では神経突起の膜特異的蛋白質であるHPC-1の機能について、アンチセンスDNA等の投与により生合成を抑制した効果を、特に神経伝達物質放出との関連に注目して調べることを目的とした。実験には山口の開発した太い(5-10mum)神経突起末端部を持つラット脊髄後根神経節細胞の単離培養系を用いた。HPC-1に対する抗体を用いた免疫細胞化学的検索の結果、この太い神経突起の全体にわたってHPC-1は強く発現してることが解った。この太い神経突起末端部が軸索末端部と見なせるか検討した。ホールセルクランプ法で突起末端部の電流を記録するとTTX感受性Na細胞が存在していた。また、中枢神経細胞軸索特異的蛋白質であるタウに対する抗体で染めたところ、すべての神経突起が陽性であった。さらに、シナプス顆粒膜の特異的蛋白質シナプトファイシンに対する抗体で染めたところ、特に太い先端部に高密度に存在していることが示された。以上の結果は太い神経突起末端部が軸索末端部と見なせる、ということを示唆している。しかし、中枢神経細胞の樹状突起特異的蛋白質であるMAP2に対する抗体で染めたところ、太い突起の中にも陽性のものが見られた。従って、太い神経突起は軸索的性質が強く発現されているが、未分化な部分も残っていると考えられた。次にHPC-1メッセンジャーRNAに対するアンチセンスDNA(24mer)を単離直後のDRG細胞に与えた。結果は全く予想外で太い突起の再生は全く見られなくなり、無数に分岐した細い突起が網目状に再生した。このことからHPC-1は神経伝達物質の放出機構に関与するのみならず、形態形成にも関与し、軸索膜を安定化させ、分岐形成を抑制しているということが初めて示された。学習等の過程において、HPC-1のdown-regulationにより軸索の出芽が生じ新たなシナプス結合が形成される可能性があり、今後検討して行きたい。

In this study, the protuberance of proteins in the membrane, the mechanism of HPC-1, the mechanism of DNA, and so on, are used to inhibit the synthesis of the product, and to pay attention to the purpose. During the opening of the mountain pass, the end of the mountain pass (5-10mum) is supported at the end of the ridge and the root cell is isolated from the culture system. The HPC-1 antibody was detected by immunocytochemistry, the results of immunocytochemistry, the protuberance of the whole body, the HPC-1, and the results of immunocytochemistry. The end of the protuberance, the end of the rope, the end of the rope, the end of the cord. The current recording at the end of the protuberance was recorded and the sensitivity to TTX was detected in the Na cells. The protein of the central god, the cell, the protein, the antibody, the antibody, the protuberance, the protuberance of the central god, the protein of the cell, the antibody of the antibody, the protuberance of the brain, the protuberance of the god, the protuberance of the god, the protein of the central god, the protein of the central god, the protein of the cell, the antibody of the antibody, the protuberance of the god, the protuberance of the brain, the protuberance of the god, the protuberance of the brain. The protein of the granule membrane was stained with antibodies, and there was a high density at the end of the granule membrane. The above results show that the end of the protuberance, the end of the cord, the end of the cord. The protein of the central nervous system, the cell-like process, the protein, the MAP2, the antibody, the protuberance, the sex, the sex, the sex. The sexual strength of the protuberant cords of the nerves and nerves is strong, and the undifferentiated parts are crippled. The next time you HPC-1, you need to RNA the cell. After the DNA (24mer) is separated, the DRG cell and the cell will be closed. Results it is possible to regenerate the whole network and the network of bifurcation network. The information system, the HPC-1 system, the system, the equipment, the equipment, the structure, the structure, the stability, the bifurcation and the formation of bifurcation. Students in the process of learning, HPC-1, down-regulation, and so on, are in the process of sprouting, new students and new students are combined to form a possibility test, and the future will be successful.

项目成果

Nagahama,M.: "Immvnohistochemical demonstration of newron specific antigen HPC-1 in the enteric nervous system of He guirea-pig distal colon." Neurosience Letters. 160. 37-40 (1993)

Nagahama,M.：“免疫组织化学证明黑猪远端结肠的肠神经系统中新细胞特异性抗原 HPC-1。”

Koh,S.: "Immunoelectron microscopic localization of the HPC-1 antigen in rat cerebellum." Jownal of Newiytology. 22. 995-1005 (1993)

Koh,S.：“大鼠小脑中 HPC-1 抗原的免疫电子显微镜定位。”

Akagawa,K.: "Enhancement of neurite sprouting and NA-release by functional suppression of HPC-1(Synraxin)in cultcred nerve cells" Society for Neuroscience abstracts. 19. 875 (1993)

Akakawa,K.：“通过功能性抑制培养神经细胞中的 HPC-1（Synraxin）来增强神经突萌芽和 NA 释放”神经科学学会摘要。

Yamaguchi,K.: "Suppression of the slow K-current by cholinergic agonists in cultured chick cochlear gunglion ewrones" Jownal of Physiology. 464. 213-228 (1993)

Yamaguchi,K.：“胆碱能激动剂对培养小鸡耳蜗弓形虫中慢 K 电流的抑制”《生理学杂志》。

Yamaguchi,K.: "Ragulation of newile-outgrowth by intracellular calcium in cultured mammalian neuron" Bomedical Reseerch. 14suppl.2. 161-162 (1993)

Yamaguchi,K.：“培养的哺乳动物神经元中细胞内钙对新线生长的调节”Bomedical Research。