人為的に形成させた培養中枢神経細胞間シナプスを用いた逆行性情報伝達物質の検定

使用培养的中枢神经细胞之间人工形成的突触测定逆行信息传递者

• 批准号: 04267221
• 负责人: 山口 和彦
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04267221/
• 关键词: 逆行性伝達物質; アラキドン酸; Kチャネル; 培養神経細胞; 神経突起末端部; パッちクランプ法; ホールセルクランプ法

本研究は(1)逆行性伝達物質が脊椎物物シナプス前末端部に作用する証拠を得ること(2)その分子機構を検討すること、を目標とした。(1)脊椎動物シナプス前末端部のモデルとして培養脊髄後根神経節(DRG)細胞神経突起末端部を用い、この部分のイオンチャネルに対する逆行性伝達物質、特にアラキドン酸作用について検討した。成熟ラットDRG細胞の単離培養系では太い(直径10μm)神経突起末端部を得ることができ、イオンチャネルについてパッチクランプ法により調べることができる。特にKチャネルに及ぼすアラキドン酸の効果について、ホールセルクランプ法により調べた。その結果アラキドン酸は50μMでは脱分極で開くチャネルを通る外向き電流を弱く(8%)抑制した。500μMアラキドン酸は多くの突起先端部(63%)て外向き電流を抑制した(23%)。これらの結果はアラキドン酸が伝達物質放出に増強的に効く可能性を示唆しらいる。しかし17%の突起先端部においてアラキドン酸は外向き電流を増強させた。ホールセルクランプ法では細胞内情報伝達系がウオッシュアウトされるため、その程度の違いによって結果にばらつきがでたのかも知れない。ともかくアラキドン酸ガ脊椎動椎神経末端部のイオンチャネルに作用することを本研究は初めて示し、伝達物質放出調節に関与し得ることせ示唆した点は意義深い。(2)分子機構について:上記アラキドン征の効果は神経末端部のCa濃度を調節し貯蔵サイトから放出サイトに顆粒を移行させる過程を制御するモデルに有利であるが、活性帯からの速い伝達物質放出過程に逆行性伝達物質が効く可能性もある。これを調べるため、海馬、大脳皮質等の脳切片共培養系を開発し、活性帯の分化した場合とそうでない場合でアラキドン酸のシナプス伝達に及ぼす吉用に違いがあるか否か検討しつつあるが必ずしも安定したシナプス結合が得られず実験は容易ではない。

The purpose of this study is to (1) investigate the role of retrograde molecules in the anterior and distal regions of vertebrates, and (2) investigate the molecular mechanisms of these molecules. (1)In vertebrates, the anterior terminal part of the spinal root ganglion (DRG) cells is cultured, and the terminal part of the spinal root ganglion (DRG) cells is used for retrograde transmission of substances and special acid. Mature DRG cells isolated from culture lines were isolated from the central nervous system (diameter 10μm). In particular, the effect of the K-ring and the K-ring on the acid is adjusted. The results show that the current is weak (8%) when the polarization is 50μM. 500μM acid inhibited the outward current (63%). The results show that the possibility of increasing the emission of acid and substances is increasing. 17% of the protrusion tip part is in the middle of the groove, and the outward current is increased. The cellular information transmission system is the result of a variety of activities. This study is intended to demonstrate the relationship between the regulation of substance release and its effect on the spinal cord. (2)Molecular mechanism: the above mentioned phenomenon of calcium concentration regulation in the terminal part of the brain, storage, release, particle migration process control, favorable, active, rapid release of substances release process retrograde, substance release possibility. The development and differentiation of active bands in co-culture system of hippocampus, hippocampus and cortex slices were investigated.

项目成果

Yamaguchi,K.: "Effect of arachidonec acid on the growth cone membrane currents of the culruted rat dorsal root ganglion neuron." Neurosi.Research. Suppl.17. S59 (1992)

Yamaguchi,K.：“花生四烯酸对培养的大鼠背根神经节神经元生长锥膜电流的影响。”

Yamaguch,K.: "Electrophysiological proporties of the growth cone membrane of hre culrured rat dorsal root ganglion" Japanese Journal of Physiology. 42Suppl. S119 (1992)

Yamaguch，K.：“培养大鼠背根神经节生长锥膜的电生理学特性”日本生理学杂志。

Shiro,T.: "Induction of cell process outgrowth with submembranous actin filaments in fibroblasts by A overexpression." Sociely for Neuroscience Absracrs. 18. 413 (1992)

Shiro,T.：“通过 A 过度表达诱导成纤维细胞中膜下肌动蛋白丝的细胞生长过程。”

Akagawa,K.: "Srudies on the function of the neuronal memvrone protein,HPC-1." Newosi.Research. Suppl.17. S198 (1992)

Akakawa,K.：“神经元 memvrone 蛋白 HPC-1 功能的研究。”

Yamaguchi,K.: "Neurite-outgrowth and Ca channel." Newosi.Research. Suppl.17. S49 (1992)

Yamaguchi,K.：“神经突生长和 Ca 通道。”