RNPトランスフェクション技術を用いたネガティヴストランドRNAウイルスの研究

利用RNP转染技术研究负链RNA病毒

• 批准号: 05264201
• 负责人: 榎並 正芳
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05264201/
• 关键词: インフルエンザウイルス; 複製; 翻訳; NS1蛋白; M1蛋白

インフルエンザウイルスA型のM1蛋白温度感受性変異株ts-51感染細胞内で、ウイルスゲノムRNAの挙動をin situハイブリダイゼーション法を用いて解析した。さらに、蛍光抗体法によりM1蛋白の挙動を解析した。その結果、感染後期に合成されるM1蛋白が核内に存在するRNP複合体(リボ核蛋白複合体)と複合体を形成し、この複合体が細胞質へ移行し、ウイルス粒子へ取り込まれると考えた。ウイルス成熟課程で重要な機能を担い、感染後期に最も良く発現されるM1蛋白の発現制御について解析した。その結果、M1蛋白の発現はNS1蛋白及びM1蛋白により翻訳段階で促進されること、及び、翻訳開始部位上流のRNA配列がこの促進に関与することを明らかにした。次に、インフルエンザウイルスの他の分節からの発現に及ぼすNS1蛋白の影響を調べ、その特異性について解析した。その結果,NS1蛋白はNA、NP蛋白の発現を促進するが、PB1蛋白の発現には、影響しない事を明らかにした。核から細胞質に移行したM1蛋白-RNP複合体がウイルス粒子に取り込まれる機構を知るため、ウイルス膜蛋白の一つNA(ノイラミニダーゼ)のインフルエンザウイルスA型亜型間で良くアミノ酸配列が保存されている細胞質ドメイン、及び膜貫通ドメインに種々の変異を導入しウイルス粒子形成とウイルスの増殖に与える影響を調べ、その機能を解析した。その結果、インフルエンザウイルスA型では、NA蛋白の細胞質ドメイン6残基と続く膜貫通ドメイン6残基は共に感染症ウイルス粒子形成にとって重要であることが明らかとなった。

M1 protein thermosensitive mutant ts-51 infected cells were analyzed by the method of in situ hybridization. In this paper, the M1 protein activity was analyzed by using fluorescent antibody method. As a result, M1 protein was synthesized in the late stage of infection, and the RNP complex (nuclear protein complex) was formed in the nucleus. The complex was transferred to the cytoplasm, and the particle was extracted from the nucleus. It is important to understand the development and control of M1 protein in the late stage of infection. As a result, the expression of M1 protein was promoted by NS1 protein and M1 protein in the upstream RNA alignment at the beginning of translation. In addition, the expression of NS1 protein and its specificity were analyzed. As a result, NS1 protein promotes the development of NA and NP protein, and PB1 protein affects the development of NA and NP protein. M1 protein-RNP complex is a complex of nuclear, cytoplasmic, and membrane proteins. The structure and function of the A-type cell line are analyzed. The structure and function of the A-type cell line are analyzed. The results show that: (1) the cell line is preserved, and (2) the membrane is penetrated. As a result, the cytoplasmic 6 residues of NA protein are important for the formation of infectious disease particles.

项目成果

K.Enami: "An influenza virus temperature-sensitive mutant defective in the nuclear-cytoplasmic transport of the negative-sense viral RNA." Virology. 194. 822-827 (1993)

K.Enami：“一种流感病毒温度敏感突变体，其负义病毒 RNA 的核胞质运输存在缺陷。”

K.Enami: "Influenza virus NS1 protein stimulates translation of the M1 protein." J.Virol.68(印刷中). (1994)

K.Enami：“流感病毒 NS1 蛋白刺激 M1 蛋白的翻译。”J.Virol.68（出版中）。