蛋白質リン酸化酵素阻害剤によるインフロエンザウイルス複製阻害の分子機構

蛋白激酶抑制剂抑制流感病毒复制的分子机制

• 批准号: 09877064
• 负责人: 榎並 正芳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877064/
• 关键词: インフルエンザウイルス; 蛋白質リン酸化; 蛋白質リン酸化酵素阻害剤; NS1; 翻訳調節

ウイルス感染細胞を蛋白質リン酸化酵素阻害剤H8で処理するとNS1のリン酸化が阻害され、さらに後期蛋白の翻訳促進が特異的に阻害された。NS1はリン酸化蛋白で、感染細胞内ではトレオニンが、試験管内のリン酸化反応ではセリンとトレオニンのリン酸化が確認されている。しかし関与するリン酸化酵素は同定されていなかった。ウイルス感染細胞内でのリン酸化酵素阻害剤を用いた結果では、NS1蛋白のリン酸化阻害は、G-キナーゼ(cGMP依存性蛋白質リン酸化酵素)の阻害剤であるH-8が最も強く、次にC-キナーゼ阻害剤H-7による阻害が見られた。A-キナーゼ阻害剤H-89や、KN-62、CKI-7、ML-7による有意な阻害は見られなかった。一方、試験管内リン酸化反応では、精製A-キナーゼ、C-キナーゼ、G-キナーゼのいずれによっても同程度に強くリン酸化された。in vitroでリン酸化によるNS1の翻訳調節とRNP結合活性の解析を行ったが、今までの所リン酸化による有意な活性制御は確認していない。一方、NS1蛋白に欠損を持つ変異ウイルスdl12とN110を、遺伝子組換えにより作成し解析した所、dl12はN端付近の12残基を欠失するが、温度感受性となり、39℃で感染後期にすべてのウイルス蛋白の翻訳が特異的に阻害された。また、N110はC端側52%を欠失するが、すべての温度で後期蛋白の翻訳だけが特異的に阻害された。また、NS1のC端側52%に主たるリン酸化部位が存在する結果を得た。以上の結果から、リン酸化酵素阻害剤によるウイルス複製阻害機構には、少なくともNS1が関与していると思われる。また、NS1は感染細胞内では翻訳制御に関っていて、G-キナーゼによるリン酸化がその活性制御に関っていると思われる。一方、in vitroのリン酸化ではその特異性が緩み、in vivoの現象を再現していないと思われる。

ウ イ ル ス infected cells を protein リ ン acidification enzyme inhibitor against tonic H8 で 処 Richard す る と NS1 の リ ン acidification が resistance against さ れ, さ ら に late protein の turn 訳 promote が specific に resistance against さ れ た. Protein NS1 は リ ン acidification で, infection cell で は ト レ オ ニ ン が, test tube の リ ン acidification anti 応 で は セ リ ン と ト レ オ ニ ン の リ ン acidification が confirm さ れ て い る. The <s:1> った is associated with するリ <s:1> acidifying enzyme されて, されて な った った った. ウ イ ル ス within infected cells で の リ ン acidification enzyme inhibitor against tonic を い た results で は, NS1 protein の リ ン acidification resistance against は, G - キ ナ ー ゼ (cGMP dependence protein リ ン acidification enzyme) の resistance against tonic で あ る H - 8 が も く, most times に C - キ ナ ー ゼ resistance against one of the H - 7 に よ る resistance against が see ら れ た. A-キナ キナ ゼ ゼ inhibitors H-89や, KN-62, CKI-7, ML-7による intentional な inhibition られな see られな られな った. One party, the test tube リ ン acidification anti 応 で は, refined A - キ ナ ー ゼ, C - キ ナ ー ゼ, G - キ ナ ー ゼ の い ず れ に よ っ て も with strong degree に く リ ン acidification さ れ た. The in vitro で リ ン acidification に よ る NS1 の turn 訳 adjust と RNP binding activity の parsing line を っ た が, today ま で の is リ ン acidification に よ る intentionally な active suppression は confirm し て い な い. Side, NS1 protein に owe loss を つ - different ウ イ ル ス dl12 と N110 を, heritage 伝 subgroups in え に よ り made し parsing し た, dl12 は n-terminal paying nearly 12 residues の を owe lost す る が, temperature sensibility と な り, 39 ℃ で late infection に す べ て の ウ イ ル ス protein の turn 訳 が specific に resistance against さ れ た. Youdaoplaceholder0, 52%を underloss on the <s:1> c-terminal side of N110 するが するが, すべて <s:1> temperature で late protein <s:1> translocation 訳だけが specific に inhibition された. Youdaoplaceholder0, 52% of the に main たるリ <s:1> acidified site が on the c-terminal side of NS1 また exists する result を た. の above results か ら, リ ン acidification enzyme inhibitor against tonic に よ る ウ イ ル ス copy resistance against institutions に は, less な く と も NS1 が masato and し て い る と think わ れ る. ま た, NS1 は within infected cells で は turn 訳 suppression に masato っ て い て, G - キ ナ ー ゼ に よ る リ ン acidification が そ の active suppression に masato っ て い る と think わ れ る. Side, the in vitro の リ ン acidification で は そ の specificity が slow み, the in vivo を の phenomenon reappearing し て い な い と think わ れ る.

项目成果

榎並正芳: "第2版微生物学実習提要(東京大学医科学研究所学友会編)14,2,8 インフルエンザウイルススベクター" 丸善(株)(印刷中), (1998)

江波正义：“第2版微生物学实践概要（东京大学医学科学研究所校友会编）14,2,8流感病毒载体”丸善株式会社（正在出版），（1998年）

榎並正芳: "インフルエンザウイルスNS1,NS2蛋白の構造,機能と発現制御" 日本臨床. 55. 2605-2609 (1997)

Masayoshi Enami：“流感病毒 NS1 和 NS2 蛋白的结构、功能和表达调节”日本临床杂志 55. 2605-2609 (1997)。

榎並正芳: "インフルエンザウイルスの分子生物学、-ウイルス工学と細胞生物学の接点" 実験医学. 15. 2356-2361 (1997)

Masayoshi Enami：“流感病毒的分子生物学 - 病毒工程与细胞生物学的交叉点”实验医学。 15. 2356-2361 (1997)