权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

インフルエンザウイルスNS1蛋白質による翻訳制御の分子機構

流感病毒NS1蛋白翻译控制的分子机制

基本信息

批准号：
09278211
负责人：
榎並正芳
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)インフルエンザウイルスの遺伝子発現調節は、翻訳段階でウイルスNS1蛋白が後期蛋白をコードするmRNAの翻訳開始部位上流に存在する翻訳調節シグナル(TRS)を認識して促進することにより行われる。2)ウイルス感染細胞を蛋白質リン酸化酵素阻害剤H8で処理するとNS1のリン酸化が阻害され、さらに後期蛋白の翻訳促進が特異的に阻害された。3)ヘルパーウイルスを必要としない新しいインフルエンザウイルスの遺伝子操作技術(RNase H法)を開発し、これを用いてNS1蛋白に変異を持つウイルスdl12とN110を作成した。dl12は、N端付近の12残基を欠失するが、温度感受性となり39℃で感染後期にすべてのウイルス蛋白の翻訳が特異的に阻害された。N110はC端側52%を欠失するが、すべての温度で後期蛋白の翻訳だけが特異的に阻害され、ウイルス産生は親株の5-10%に抑制された。4)これら親株と変異株のNS1を、培養細胞内でプラスミドベクターから発現する系を作成し解析を行った。また、GSTタッグを付けたこれらの蛋白を大腸菌で大量に発現し、アフィニティーカラムで精製し解析を行った。5)NS1のC端側52%に主たるリン酸化部位が存在する事が明らかとなった。6)NS1のリン酸化には、細胞内でG-キナーゼの関与が示唆されたが、in vitroのリン酸化反応では、精製A-キナーゼ、C-キナーゼ、G-キナーゼのいずれによっても同程度に強くリン酸化された。in vitroでは、リン酸化によるNS1の翻訳調節とRNP結合活性の調節は確認されなかった。7)WSNのNS1には結合するが変異N110のNS1には結合しない宿主蛋白を確認したので、さらに機能との関りから解析を進めている。

1) there is a significant increase in the amount of information that exists in the upper stream at the beginning of the NS1 protein flip (TRS). In this case, there is a general understanding that there is a significant improvement in the quality of the system. 2) H8 protein is blocked by acidifying enzyme, NS1 protein is blocked by acidifying enzyme, and protein reversal is used to promote specific protein reversal. 3) it is necessary to improve the operation technology (RNase H method) and use the NS1 protein to improve the performance of the system. Dl12, N-terminal insufficiency of 12 residues, temperature sensitivity of 39 ℃, post-infection resistance of protein, and temperature sensitivity. 52% of the C-terminal of N110 was deficient, the protein in the later stage of the temperature was blocked, and the strain was 5-10% inhibited. 4) the NS1 strains were isolated and analyzed in vitro, and the analysis lines were made. A large number of bacteria can be found in large quantities, such as protein, protein, protein. 5) the acidified part of the C-terminal of NS1 contains 52% of the acidified parts. 6) NS1 acidification, intracellular acidification, in vitro acidification, A-acid, C-acid, G-acid, acid and acid. In vitro, acidify, NS1, flip, RNP, combine activity to make sure that you don't know what's going on. 7) the WSN NS1 assay combined with the N110 NS1 assay and the host protein assay confirmed the infection, and the machine was able to verify the diagnosis.