蛋白質結晶内反応を可視吸収変化により追跡するシステムの性能評価

使用可见吸收变化跟踪蛋白质晶内反应的系统的性能评估

• 批准号: 07224101
• 负责人: 足立 伸一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07224101/
• 关键词: 時分割; タンパク質結晶構造解析; 可視過渡吸収

平成5、6年度の本重点領域研究の研究費により、我々は落射蛍光顕微鏡を蛋白結晶の可視吸収スペクトル測定装置として改造を行なった。本装置は結晶の透過光をファイバーを通して分光器に導入し、スペクトル測定解析を行うシステムであり、50ミクロン以上の結晶を用いて非反応条件下のスペクトル測定が可能であることを確認した。さらに今年度は、昨年度改造を行なった装置をもとに、トリガー用Nd:YAGレーザーを組み合わせ、一酸化炭素結合型ミオグロビン結晶の時間分解スペクトルの測定をおこなった。Nd:YAGレーザーで励起後、ゲート時間1-10ミリ秒程度で一酸化炭素分子の解離・再結合反応に伴う過渡吸収スペクトルの変化を観測できることを確認し、本装置が蛋白質結晶内におけるミリ秒オーダーのダイナミクスを捕えるのに有用であることを示すことができた。Nd:YAGレーザーは我々の研究室に既存のものを流用し、タイミング設定回路、レーザー光路設定用多層膜ミラー等を新たに製作、導入した。この改造に必要な電子部品、光学部品の購入に消耗品費を充てた。(足立、飯塚、城)。さらに今年度は、ミオグロビン以外の蛋白質結晶反応系についても予備的なスペクトル測定をおこなった。主な反応系は以下のものである。試料名 試料保有者ヘモグロビンα(Mg)_2β^<E11l>(Fe-CO)_2 大阪大学 森本英樹助教授ω-アミノ酸:ピルビン酸アミノ基転移酵素 筑波大学 坂部知平教授グルタチオン合成酵素 京都大学 加藤博章博士一酸化窒素還元酵素チトクロムP450nor 筑波大学 祥雲弘文教授上記の試料についても、今後時分割スペクトル測定を目指して測定条件の検討を行ってゆく予定である。

Research expenses for this key area of research in 2005 and 2006 were increased by retrofitting the optical absorption measurement device for protein crystals with an epi-luminescent microscope. This device allows for the transmission of light from crystals to spectrometers, and for the determination of crystals above 50 ° C, and for the determination of crystals under non-reflective conditions. This year, the annual transformation of the device, the use of Nd:YAG, a combination of acid carbon, a combination of time decomposition of the determination of After Nd:YAG is excited, the reaction time is about 1-10 seconds, and the dissociation and recombination of an acidified carbon molecule are accompanied by the transition of absorption and transformation. The device can be used to confirm the reaction time in protein crystallization. The existing Nd:YAG laser beam is used in our research laboratory, and the digital configuration setting circuit and the multi-layer film laser for laser beam path setting are newly produced and introduced. The cost of consumables for the purchase of electronic and optical components necessary for the transformation was increased. (Adachi, Iizuka, Castle). This year, the protein crystallization reaction system in addition to the preparation of the sample test. The Lord's will is the will of the Lord. Sample name Sample holder α(Mg)_2β^<E11l>(Fe-CO)_2 Assistant Professor Hideki Morimoto, Osaka University ω-Acid: Acid Enzyme Professor Tomohei Sakabe, University of Tsukuba

项目成果

Yoshitsugu Shiro: "Spectroscopic and Kinetic Studies on Reaction of Oytochrome P450nor with Nitric Oxide" J. Biol. Chem.270. 1617-1623 (1995)

Yoshitsugu Shiro：“Oytochrome P450nor 与一氧化氮反应的光谱和动力学研究”J. Biol。

Nobuhisa Watanabe: "Macromolecular crystallography station BL-18B at the Photon Factory" Rev. Sci. Instrum.66. 1824-1826 (1995)

Nobuhisa Watanabe：“光子工厂的高分子晶体学站 BL-18B”Rev. Sci。