マイクロ流体技術を用いた新規なタンパク質結晶構造解析ツールの開発

利用微流控技术开发新型蛋白质晶体结构分析工具

• 批准号: 15J04557
• 负责人: 真栄城 正寿
• 金额: $ 1万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J04557/
• 关键词: マイクロデバイス; タンパク質; 結晶化; X線回折

今年度は、マイクロ流体技術を用いた結晶化制御方法の確立に取り組んだ。タンパク質結晶化は、これまでは熟練者の勘や経験に大きく依存していた。結晶化制御は経験則に基づくことが多く、系内で複数の単結晶が合体や密集すると構造解析が困難になる。そこで、マイクロ流体制御技術と種結晶法を組み合わせたタンパク質結晶化制御方法の確立を試みた。まず、共同研究者から提供を受けた南極産好冷細菌由来のグルコキナーゼ（PsGK）の結晶化制御を行った。PsGKは、従来の結晶化方法（ハンギングドロップ蒸気拡散法）では、結晶同士が集積して良質な単結晶を作製することが困難であった。しかしながら、結晶化空間を精密に制御したマイクロ流体デバイスを用いることで、結晶化の制御が可能であった。また、結晶化空間のサイズ（深さ）によって、結晶化挙動が大きく変化することが明らかになった。具体的には、深さが50μmの結晶化空間ではロッド状の結晶が析出したが、深さが10μmの結晶化空間ではプレート状の結晶が析出した。この現象の普遍性を確認するために、リゾチーム、およびNADPH-シトクロムP450還元酵素-ヘムオキシゲナーゼ（CPR-HO）複合体の結晶化挙動の解析と制御に取り組んだ。CPR-HO複合体の結晶も従来の結晶化方法（ハンギングドロップ蒸気拡散法）では、結晶同士の集積が確認された。一方で、マイクロ流体デバイスでは、1個の単結晶のみを析出させることができた。

This year, the application of fluid technology to the establishment of crystallization control methods The quality of crystallization depends on the quality of the crystal. Crystallization is difficult to control the formation of multiple crystals within a system. A method for the preparation of liquid crystals is proposed. The co-investigators provided information on the origin and crystallization of Antarctic cryobacteria (PsGK) PsGK is difficult to prepare by the crystallization method (evaporation method), which is similar to the aggregation method and high quality crystallization method. Crystallization space is precisely controlled. Crystallization control is possible. Crystallization space and crystallization space Specifically, the crystallization space at a depth of 50μm is filled with crystals, and the crystallization space at a depth of 10μm is filled with crystals. The universality of this phenomenon was confirmed by the analysis and control of crystallization kinetics of NADPH-HO complex. Crystallization method of CPR-HO complex (evaporation method) was used to confirm the aggregation of the crystallization phase. One side, one side.

项目成果

マイクロ化学チップの最新動向：紙チップとタンパク質結晶構造解析チップ

微化学芯片最新趋势：纸芯片和蛋白质晶体结构分析芯片

• 发表时间: 2015
• 期刊: グリーンテクノロジー
• 作者: 真栄城正寿;渡慶次学
• 通讯作者: 渡慶次学

University of Illinois(米国)

伊利诺伊大学（美国）

An Approach for Controlling Epitaxial Growth of Protein Crystal by Using Microfluidic Device

利用微流控装置控制蛋白质晶体外延生长的方法

• 发表时间: 2015
• 作者: Maeki M;Pawate A S;Sugishima M;Watanabe K;Tokeshi M;Kenis P J A;Miyazaki M
• 通讯作者: Miyazaki M

Development of Microfluidic Device for Protein Crystallization and Its Application for X-ray Analysis

蛋白质结晶微流控装置的研制及其在X射线分析中的应用

• 发表时间: 2015
• 作者: Maeki M;Pawate A S;Sugishima M;Watanabe K;Tokeshi M;Kenis P J A;Miyazaki M
• 通讯作者: Miyazaki M

Protein Crystal Growth in Confined Space of Microfluidic Device

微流控装置密闭空间中蛋白质晶体的生长

• 发表时间: 2015
• 作者: Maeki M;Pawate A S;Sugishima M;Watanabe K;Tokeshi M;Kenis P J A;Miyazaki M
• 通讯作者: Miyazaki M