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糖脂質による細胞表層シグナル伝達タンパク質の配向の制御

糖脂控制细胞表面信号蛋白的方向

基本信息

批准号：
09240235
负责人：
横山三紀
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.MBP-CD38とガングリオシドとの共結晶の構造解析(1)界面活性剤非存在下でのMBP-CD38の大量調製本研究ではCD38とガングリオシドとの共結晶の構造解析を計画している。膜タンパク質であるCD38をそのまま大量に調製することは困難であることが予想されたので膜貫通部分を切り落とし、MBP-CD38(約66kDa)の大量調製を行った。大腸菌で発現させたMBP-CD38は不活性型であり、塩酸グアニジン存在下で透析することにより活性化が少量現れる。発現したMBP-CD38のS-S結合をDTT存在下で切断してから透析を行ったところ活性型の収率が上昇しまた界面活性剤非存在下での大量調製が可能になった。現在8Lの大腸菌培養液から約80mgのMBP-CD38が得られ、ゲル濾過カラムとFPLC MonoQカラムにより約1mgを活性型として得ている。(2)結晶下の条件検討MBP-CD38を直接濃縮すると、沈澱を生じて回収率が悪かった。そこでガングリオシド存在化で濃縮したところ回収率の低下が起こらなくなった。現在結晶化の条件検討を開始している。2.in vivoにおけるCD38とガングリオシドとの相互作用レチノイン酸処理をおこなうことによりHL60細胞の表面にCD38を発現させることができる(以下RA-HL60)。RA-HL60細胞の培地にガングリオシドを加えた場合にもNAD分解量の減少が見られた。阻害の程度は糖鎖構造に依存した。並行しておこなったFlow cytometryの実験では細胞表面のCD38量にはガングリオシド処理による変化がなかったのでガングリオシドはRA-HL60細胞の表面においてCD38と相互作用してそのNADase活性を阻害すると考えられる。

The analysis of the co-crystallization of 1.MBP-CD38 (1) in the absence of interfacial activity (1) A large number of samples of MBP-CD38 in the absence of interfacial activity. in this study, we analyzed the co-crystallization of CD38 in the absence of interfacial activity. There are many problems in the membrane, such as the CD38, the membrane, the membrane, the It was found that MBP-CD38 was inactive and acid was not active in the presence of dialysis. In the presence of the combination of MBP-CD38 and Smurs and DTT, there are significant differences in the rate of active interface between the two groups. At present, in the 8L culture solution, 80mg MBP-CD38 has been obtained, and 1mg has been tested by 1mg in the presence of 1mg. (2) under the condition of MBP-CD38, the rate of return is higher than that of normal students. The rate of return is low since the rate of existence is low. Now that the crystallization condition is started, we will begin to improve the performance. 2.in vivo, CD38, acid, HL60, acid, acid, The amount of NAD decomposition in RA-HL60 cells is much lower than that in the control group. The degree of hindrance, sugar, and dependence. At the same time, the cell surface was characterized by the amount of CD38, the amount of CD38, the cell surface, the cell surface, the RA-HL60 cell surface, the NADase activity, the NADase activity, the cell surface, the cell surface,