糖脂質による細胞表層シグナル伝達タンパク質の配向の制御

糖脂控制细胞表面信号蛋白的方向

• 批准号: 11121232
• 负责人: 横山 三紀
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11121232/
• 关键词: ガングリオシド; NAD; CD38; エクト型酵素; 細胞膜; シグナル伝達

1.NAD分解酵素であるリンパ球表面抗原CD38を用いて、ガングリオシドとの相互作用を明らかにするために結晶構造解析をこころみた。マルトース結合蛋白質とCD38の細胞外ドメインとの融合蛋白質(MBP-CD38)を大腸菌で発現させた。発現させたMBP-CD38の大部分は正しいSS結合のかかっていない不活性型であったため、チオレドキシンとの共発現系を用いて安定に活性の高いMBP-CD38を調製する方法を確立した。MBP-CD38とガングリオシドGT1bとの結晶化のハンギングドロップ法での条件検討をおこない、PEG10,000を沈殿剤として結晶を得た。この結晶から分解能2.4オングストロームの反射を得ることに成功した。2.CD38を発現している細胞にガングリオシドを取り込ませると、CD38のNAD分解活性が抑制される。ガングリオシドの効果が同一細胞表面上のCD38とのシスの相互作用であつのか、又はCD38とガングリオシドとがトランスで相互作用する結果なのかを明らかにするために、THP-1細胞のCD38-トランスフェクタントを用いた実験を行った。CD38-トランスフェクタントにGT1bを取り込ませた場合にはNAD分解活性の阻害が起こったが、導入をおこなっていないコントロールの細胞にGT1bを取り込ませたものをCD-38トランスフェクタントと共存させた場合には阻害が起こらなかった。このことから阻害はCD38とGT1bとが同一細胞の表面にあるシスの場合に起こることが強く示唆された。

1. NAD decomposing enzyme is used to analyze the crystal structure of CD38. A fusion protein (MBP-CD38) was developed in E. coli. Most of MBP-CD38 was found to be positive, and the method of modulation of MBP-CD38 with high activity was established. Conditions for crystallization of MBP-CD38 and PEG 10,000 were discussed. The crystal decomposition energy is 2.4 degrees. 2. CD38 is expressed in the middle of the cell cycle, and the NAD decomposition activity of CD38 is inhibited. CD38-cell interaction on the same cell surface and CD38-cell interaction on THP-1 cells. CD-38-T cell GT1b is selected from the list of CD-38-T cells and introduced into the list of CD-38 cells. This is the case with CD38 and GT1b.

项目成果

M. Kukimoto: "Crystallization and Preliminary X-Ray Diffraction Analysis of the Extracellular Domain of the Cell Surface Antigen CD38 Complexed with Ganglioside"The Journal of Biochemistry. 127(2). 181-184 (2000)

M. Kukimoto：“与神经节苷脂复合的细胞表面抗原 CD38 的胞外结构域的结晶和初步 X 射线衍射分析”生物化学杂志。