染色体安定性の癌化への関わり(DT40細胞を用いた試み)

染色体稳定性与癌变的关系（尝试使用DT40细胞）

• 批准号: 09253226
• 负责人: 岩井 裕子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09253226/
• 关键词: 染色体不安定性; 相同DNA組換え; RAD51; RAD52; RAD54; DT40細胞; DNA2重鎖切断; 修復

染色体の不安定性に関連する可能性を有する遺伝子 (特に出芽酵母で相同DNA組換え機構に関与することが知られている遺伝子のホモログ)をトリDT40細胞においてノックアウトしその機能を解析し以下の諸点を明らかにした。1.RAD54欠損細胞は放射線照射、メチルメタンスルホン酸(MMS)処理に対して強い感受性を示した。ターゲットインテグレーションの効率も100倍以上低下し、RAD54遺伝子が高等真核細胞の相同DNA組み換え機構に大きく寄与していると共に、高等真核細胞のDNA2重鎖切断の修復が非相同DNA組換え機構だけでなく相同DNA組扱え機構でも修復されていることが判明した。2.RAD52はその変異株が出芽酵母で最も重篤な表現型を示し、また、生化学的に、出芽酵母とヒトと共にRAD51の相同DNA対合反応をRAD52が促進するのが報告されているにも関わらず、RAD52欠損DT40細胞はほとんど放射線照射やMMSに対する感受性を示さず、ターゲット・インテグレーションの効率のみ数倍低下した。3.RAD51欠損細胞は致死となったため、テトラサイクリン誘導プロモーターを用いたコンデイショナルノックアウトを樹立した。テトラサイクリンの添加によりRAD51の発現を抑制すると、ほぼ12時間後に細胞がG2/M期で静止しその後致死となる。致死となる前のカリオタイプの解析により、ほぼ1細胞あたり1つの染色体断裂(イソクロマチド型断裂)が観測され、通常の細胞増殖中のゲノム・インテグリテイーの保持機構に相同DNA組換え機構が重要であることが強く示唆された。

Analysis of the function of DT40 cells in relation to the possibility of chromosome instability, especially in budding yeast, in relation to the same DNA genome, and in relation to the mechanism of chromosome instability 1. RAD54 damaged cells showed strong sensitivity to radiation irradiation and MMS treatment. The efficiency of DNA sequencing was more than 100-fold lower than that of RAD54 gene. The repair of DNA2-double lock cut in higher eukaryotes was not the same DNA sequencing mechanism. 2. RAD52 and RAD52 showed that the mutant strains of budding yeast were the most sensitive to the phenotype of budding yeast and RAD51, and RAD52 promoted the same DNA alignment reaction. RAD52 showed that RAD52 was deficient in DT40 cells, and the sensitivity of budding yeast to MMS irradiation was several times lower. 3. RAD51 Defective Cells are Lethal and Inductive The addition of RAD51 inhibits the development of RAD51, and after 12 hours, the cells become quiescent and lethal in G2/M. Before death, the chromosome breaks in the cells were detected, and in normal cell growth, the same DNA genome was maintained.

项目成果

Sonoda,E.: "Rad51-deficient vertebrate cells accumulate chromosomal breaks prior to cell death." EMBO J.17. 598-608 (1998)

Sonoda,E.：“Rad51 缺陷的脊椎动物细胞在细胞死亡之前会积累染色体断裂。”

Yamaguchi-Iwai,Y: "Homeostatic regulation of copper uptake via direct binding of Macl protein to upstream reglatory sequences of FRE1 and CTR1." J.Biol.Chem. 272. 17711-17718 (1997)

Yamaguchi-Iwai,Y：“通过 Macl 蛋白与 FRE1 和 CTR1 上游调节序列的直接结合来稳态调节铜的吸收。”

Sugawara,H.: "Genetic evidence for involvement of typel,type 2,and type 3 inosotol 1,4,5-trisphosphatereceptors in signal transduction through the B cell antigen receptor." EMBO J.16. 3078-3088 (1997)

Sukawara, H.：“1 型、2 型和 3 型肌醇 1,4,5-三磷酸受体参与通过 B 细胞抗原受体进行信号转导的遗传证据。”

Bezzubova,O.: "Reduced X-Ray Resistance and Homologous Recombination Frequencies in a RAD54-/-Mutant of the Chicken DT40 Cell Line." Cell. 89. 185-193 (1997)

Bezzubova,O.：“鸡 DT40 细胞系 RAD54-/-突变体中 X 射线抗性和同源重组频率降低。”