遺伝子導入ハエを用いたDNA複製関連遺伝子の発現制御に関する研究

利用转基因果蝇研究DNA复制相关基因的表达调控

• 批准号: 09277230
• 负责人: 廣瀬 富美子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09277230/
• 关键词: ショウジョウバエ; DNA複製; 転写因子; 遺伝子導入ハエ

個体を用いたDREFの機能解析に必要な遺伝子導入ハエを樹立し、DREFの異所的な発現によってもたらされDNA複製や細胞増殖の異常を詳細に解析し、以下の結果を得た。(1)DNA結合活性および二量体形成活性の両者を有するDREFのN端125アミノ酸残基は、dominant-negativeな効果をもつことが明らかとなった。(2)唾腺においては、dominant-negative型DREFを発現させると、この組織におけるDNA複製が阻害され、DNAの多糸化の程度が抑えられたことから、DREFはendo cycleにおけるDNA複製に必須であることが証明された。(3)glass遺伝子のプロモーターを利用して、複眼原基のpost-mitoticな分化過程にある細胞で野生型DREFタンパク質を発現させると、異所的なDNA複製とアポトーシスが誘導され、秩序だった複眼の形態形成は乱されて、rough eye phenotypeを示した。また、正常な分化も乱されて、光受容細胞R1,R6,R7の形質を示す細胞が形成されなかった。このことは、DREFは、細胞増殖と分化の接点で機能する転写因子であることを意味する。(4)DREFの哺乳類細胞におけるホモログを単離する準備として、Drsosophila melanogasterの近縁種であるDrosophila virilisよりDREFホモログの遺伝子を単離し、よく保存された領域が3つ(CR1,CR2,CR3)あることを明らかにした。(5)DREFと相互作用する因子の遺伝子を単離するための、遺伝学的スクリーニングの準備を整えた。

By using the DREF machine, you can analyze the necessary input data from the DREF computer and the DNA replication cytophage. the following results have been obtained. The main results were as follows: (1) when DNA was combined with active compounds to form active compounds, the N-terminal 125-terminal acid residues of DREF were detected, and the results of dominant-negative were analyzed. (2) salivary gland infection, dominant- negative DREF infection, tissue detection, DNA replication inhibition, DNA multiplication inhibition, DREF endo cycle infection, DNA replication must be detected. (3) the process of differentiation of glass primordial primordia was detected by the use of virus, the process of differentiation of primordial DNA, the process of cell differentiation, the process of cell differentiation, the process of differentiation. The normal cells differentiated into random cells, and the light-tolerant cells R _ 1, R _ 6 and R _ 7 showed that the cells were formed. The contact points of cell differentiation, DREF and cell differentiation can be used to write the factors that affect the meaning of cell differentiation. (4) DREF, Drosophila virilis, DREF, and CR1,CR2,CR3 are in preparation for quarantine, DREF, and CR1,CR2,CR3, respectively. (5) DREF interaction, factor and sub-factors are separated from each other, and the data learned from each other is ready to be rectified.

项目成果

Takahashi,Y.et.al.: "Involvement of the DNA replication-related element (DRE) and DRE-binding factor (DREF) in transcriptional regulation of the Bombyx mori PANA gene" J.Biochem. 122. 1215-1223 (1997)

Takahashi,Y.et.al.：“DNA 复制相关元件 (DRE) 和 DRE 结合因子 (DREF) 参与家蚕 PANA 基因的转录调节”J.Biochem。

Kuge,M.et al.: "Use of a fusion protein to obtain crystal suitable for x-ray analysis : Crystallization of a GST-fused protein containing the DNA-binding domain of DNA replication-ralatef element binding factor," Protein Sci.6. 1783-1786 (1997)

Kuge,M.等人：“使用融合蛋白获得适合 X 射线分析的晶体：含有 DNA 复制-相关元件结合因子的 DNA 结合域的 GST 融合蛋白的结晶，”Protein Sci。

Hayashi,Y.et al: "Identification of CFDD (Common regulatory factor DNA replication and DREF gene) and rela its binding cite in regulation of the proliferating nuclear antigen gene promoter" J.Biol.Chom. 272. 23848-23858 (1997)

Hayashi,Y.et al：“CFDD（通用调节因子 DNA 复制和 DREF 基因）的鉴定及其在增殖核抗原基因启动子调节中的结合引用”J.Biol.Chom。

Yamaguchi,M.et.al.: "Distinct roles of E2F recognition sites as positive and negative elements in regulation of DNA polymeraseα 180kDa codalytic subunit gene promoter during Drosophila development" Nucleic Acids Res.25. 3847-3854 (1997)

Yamaguchi,M.et.al.：“E2F 识别位点作为正负元件在果蝇发育过程中 DNA 聚合酶 α 180kDa 共催化亚基基因启动子调节中的独特作用”Nucleic Acids Res.25 (1997)。