DNA複製酵素遺伝子の発現制御を担う共通の転写因子DREF

DREF，一种控制 DNA 复制酶基因表达的常见转录因子

• 批准号: 06266224
• 负责人: 廣瀬 富美子
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06266224/
• 关键词: ショウジョウバエ; DNAポリメラーゼα; PCNA; 転写因子; 発生; DNA複製

(1)DREFのDNA結合ドメインと二量体形成ドメインはN端近くの90アミノ酸残基(16-115aa)が担っていることを証明した。また、モノクローナル抗体の一つがDNA結合ドメインを認識し、DNA結合活性を抑えることを、証明した。(2)組換え型DREFを用いて、DREのコンセンサス配列が、TATCGATAであることをキャステイング法で明らかにした。ただし、中心のCGを除く5′,3′側の各3bpのうち1bpのみが変異してもin vitroでは、DREFが結合可能であった。この結果は、トランスジェニックフライを用いて行ったin vivoでのDRE配列の要求性とよく合致した。(3)DREF遺伝子のプロモーター領域の解析により、DREF遺伝子自身の発現制御領域にも、3つのDREが存在し、いずれも正の調節配列として機能していることをCATアッセイで明らかにし、また、これらのDRE配列にDREFが結合することをゲルシフト法で証明した。このことは、DREF遺伝子の発現が自己制御されていることを示す。(4)DRE/DREFシステムを介して、形態形成遺伝子のひとつであるzerknulltが、複製関連遺伝子を抑制的に制御することを明らかにしてきたが、DREF遺伝子プロモーターがzerknulltによって抑制されることを証明した。(5)ウエスタンブロット法で、DREFタンパク質は、未受精卵では低く、受精後は胚発生の進行に伴って増加することを明らかにした。これは、受精後新たに起こるDNA複製関連遺伝子の発現に対応していると思われる。また、DREFは、成虫や蛹でも比較的高く発現されており、DNA複製関連遺伝子以外の遺伝子も制御している可能性が示唆される。(6)DREFは,受精後約2.5時間の胚から核に局在するようになり、DNA複製遺伝子のzygoticな発現誘導に寄与していることが推測された。

The main results were as follows: (1) the N-terminal of DREF DNA was combined with the double body of thiazolium to form the acid residue (16-115aa) near the N-terminal of phthalazine. The antibody was detected by DNA binding assay and DNA binding activity. (2) the organization type DREF uses the following methods: DRE, TATCGATA, and so on. Except for the 5-month-old, the center-stage CG, the 5-month-old, the 3-month-old, the 3bp, the 1bp, the in vitro, and the DREF, it is possible that the combination of the two may be effective. The results show that you need to use the line to in vivo the DRE to make sure that you want sex to fit together. (3) the DREF system is used to analyze the field of information, and the DREF system itself is responsible for the control of the field, the presence of the DRE, and the configuration of the system. The system can be used to determine the accuracy of the CAT system. The configuration of the DREF system is based on the combination of the DREF system and the information system. Please make sure that you have your own control, and that you will be able to show you how to do it. Please do so. DREF. (4) the configuration of the DRE/DREF, the configuration, the zerknullt, the control, the DREF, the zerknullt, the suppression, the control, the suppression, the suppression, the control, the suppression, the control, the suppression, the suppression (5) the methods of screening, DREF, unfertilized eggs, post-fertilisation and post-fertilisation were used. After fertilisation, the DNA copy was reproduced and the pregnancy was detected. The higher levels of predator, DREF, adult pupa and DNA replicates show that it is possible to control the infection. (6) DREF, about 2.5 hours after fertilisation, the embryo nuclear bureau was able to send a direct message to the embryo after fertilisation, and the DNA replicator zygotic was sent to the embryo.